Fare Retinalarından Elde Edilen Müller Glial Hücre Kültürünün Kurulması
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 5:09 dk. • July 8th, 2025
Müller Glial veya MG hücreleri ve nöronları içeren fare retinalarını ele alalım.
Bunları sindirim enzimleri ile bir ayrışma çözeltisine koyun ve eşit enzim dağılımını sağlamak için hafif sallanma ile inkübe edin.
Bu enzimler, hücre dışı matrisi parçalayarak tek tek hücreleri ayırır.
Hücreleri serbest bırakmak için retinaları birkaç kez yukarı ve aşağı pipetleyin.
Enzim aktivitesini durdurmak için bir inhibitör ekleyin, ardından santrifüjleyin.
Süpernatanı atın.
MG hücrelerine özgü bir büyüme faktörü içeren ortamlarda hücreleri yeniden süspanse edin.
Hücreleri bir kuyuya aktarın ve inkübe edin.
Zamanla, ortamdaki büyüme faktörü MG hücrelerinin büyümesini ve çoğalmasını kolaylaştırırken, bölünmeyen nöronal hücreler yok olur.
Ortamı çıkarın. Bir tuz tamponu ile yıkayın.
Hücreleri kuyudan ayırmak için bir sindirim enzimi ile inkübe edin.
Hücreleri bir tüpte toplayın ve ardından santrifüjleyin.
Ölü nöronal hücreleri içeren süpernatanı atın.
Daha fazla analiz için MG hücrelerini ortamdaki yeniden askıya alın.
El yazmasında anlatıldığı gibi papain DNaz I ayrışma karışımını hazırlayın. Şimdi, büyütülmüş uçlu bir transfer pipeti ile retinaları alın. Retinalar ucun dibine yerleşene kadar bek
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin