Embriyonik Civciv Beyninden Beyincik Dilimleri Elde Edilmesi

Döllenmiş bir tavuğun yumurtasını uygun bir gelişim aşamasında alın.

Embriyoya erişmek için kabuğu kesin.

Kafayı bulun ve inceleyin, ardından soğutulmuş fosfat tamponu içeren bir Petri kabına aktarın.

Gözleri ve çeneleri çıkarın.

Cildi kafatasının yüzeyinden ayırın.

Ardından, kafatası kemiklerini kesin ve çıkarın.

Beyni açığa çıkarmak için çevredeki bağ dokusunu temizleyin.

Ön beyni ayırın.

Ardından, beyinciği arka beyinden ve kan damarından ayırın.

Beyincik'i soğutulmuş bir tuz tamponuna aktarın.

Embriyonik beyincik, hızla bölünen nöronal progenitör hücrelerden oluşan bir tabaka içerir ve bu da onu nörojenez çalışmaları için değerli kılar.

Beyinciğini bir doku doğrayıcı platformuna yerleştirin.

Fazla tamponu çıkarın ve beyinciği dilimleyin.

Dilimlerin üzerine soğutulmuş tuz tamponu koyun.

Beyincik dilimlerini soğutulmuş tuz tamponu içeren bir Petri kabına aktarın.

Mikroskop altında, daha fazla analiz için ayrı dilimleri ayırın.

Başlamak için, döllenmiş kahverengi tavuk yumurtalarını embriyonik 14. güne ulaşana kadar 38 santigrat derecede bir yumurta kuluçka makinesine koyun. Embriyonik 14. günde, embriyoyu ortaya çıkarmak için yumurtada bir açıklık kesin ve civciv embriyosunu ovoda dekapite edin. Kafayı buz gibi soğuk PBS içeren bir Petri kabına yerleştirin.

Diseksiyon mikroskobu altında, her bir gözün arkasında, doku boyunca bir kesi yapmak ve gözleri ve üst çeneyi çıkarmak için standart forseps kullanın. Ardından, alt çeneyi çıkarmak için farenks boyunca ikinci bir kesi yapın. Ardından, cildi kafatasının yüzeyinden soyarak çıkarmak için standart forseps kullanın. Ardından, beyni ortaya çıkaran frontal ve parietal kemikleri çıkarın.

Ventral açıdan, faringeal kıkırdağı ve yardımcı mezenşimi çıkarın. Daha sonra beyni, sırt tarafı yukarı gelecek şekilde yerleştirin ve piaya zarar vermemeye dikkat ederek mezenşimi, sırt sırtını arka beyne dikkatlice çıkarın. Ardından, beyincik de dahil olmak üzere arka beyni ayırmak için orta beyin ile arka beyin arasındaki doku boyunca bir kesi yapın. Hem beyinciğin lateral kavşaklarında hem de arka beynin alar plakasında doku boyunca kesiler yapın. Diseksiyon boyunca pia'nın bütünlüğünü korumaya özen göstererek tüm beyinciği çıkarın.

Son olarak, oluşan koroid pleksusu çıkarın ve disseke edilmiş serebellumu buz gibi soğuk HBSS'ye taşıyın. Tüm beyinciği, açıklığı genişletmek için ucu kesilmiş şekilde bir spatula veya 3 mililitrelik bir Pasteur pipeti kullanarak bir doku kıyıcının steril platformuna aktarın. Bir pipet kullanarak fazla sıvıyı çıkarın.

Doku doğrayıcının kesme hızını maksimum değerinin %50'sine ayarlayın. Ardından, beyinciği 300 mikrometre kalınlığında gerekli yönde kesin. 3 mililitrelik bir Pasteur pipeti kullanarak, dilimlenmiş beyinciği soğuk HBSS ile kaplayın.

Ardından, HBSS'yi ve dilimleri, kesilmiş uçlu 3 mililitrelik Pasteur pipetini kullanarak 20 mililitre buz gibi HBSS içeren 60 milimetrelik bir Petri kabına aktarın. Petri kabını, fiber optik ışık kaynağı ile aydınlatılmış bir diseksiyon mikroskobu altına yerleştirin. Ardından, beyin dokusunun tek tek dilimlerini ayırmak için bir saatçi forseps kullanın.