Otik progenitör hücrelerin duyusal epitel hücrelerine farklılaşması ve ardından immün boyama
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:55 dk. • July 8th, 2025
Kültür, ortamdaki multipotent otik progenitör veya iMOP hücrelerini ölümsüzleştirdi.
Ortamdaki büyüme faktörleri, iMOP proliferasyonunu ve koloni oluşumunu kolaylaştırarak otosferler oluşturur.
Otosferleri toplayın ve yerçekimi ile yerleşmelerine izin verin.
Ortamı çıkarın ve büyüme faktörleri olmayan farklılaşma ortamı ekleyin. Otosferleri plakalayın.
Büyüme faktörlerinin yokluğu, duyusal epitel hücrelerine iMOP farklılaşmasını başlatır.
Farklılaşmış otosferleri toplayın ve yerleşmelerine izin verin.
Ortamı çıkarın ve hücresel morfolojiyi korumak için bir fiksatif ekleyin.
Ardından, hücresel ve nükleer zarları geçirgen hale getirmek için bir deterjan ekleyin.
Spesifik olmayan antikor bağlanmasını önlemek için bir engelleme tamponu ekleyin.
Spesifik bir farklılaşma belirtecini hedefleyen primer antikorları tanıtın.
Birincil antikorları hedefleyen florofor konjuge ikincil antikorlar, aktini lekelemek için floresan etiketli phalloidin ve çekirdekleri boyamak için DNA bağlayıcı bir boya ekleyin.
Otosferleri monte edin.
Floresan mikroskobu kullanarak, iMOP farklılaşmasını doğrulamak için boyamayı görselleştirin.
Kaplamadan üç gün sonra, daha önce gösterildiği gibi otosferleri toplamak
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin