Ölümsüzleşmiş Multipotent Otik Progenitörlerin Spiral Ganglion Nöronlarına Ayrılması ve Farklılaşmanın Değerlendirilmesi

Bir hücre kültürü substratı ile kaplanmış steril lameller içeren çok kuyulu bir plaka alın.

Nöronal farklılaşma ortamında ölümsüzleştirilmiş multipotent otik progenitörleri veya iMOP'ları tanıtın.

iMOP'lar, işitsel bilgileri beyne ileten spiral ganglion nöronları veya SGN'ler dahil olmak üzere çeşitli iç kulak hücrelerinin öncüleridir.

Hücrelerin substrata yapışmasına izin vererek inkübe edin. Ortam, iMOP'ların SGN'lere farklılaşmasına neden olur.

Protein çapraz bağlanmasını indüklemek, hücre morfolojisini korumak için bir fiksatif ve hücresel zarları geçirgen hale getirmek için bir deterjan çözeltisi ekleyin.

Spesifik olmayan etiketlemeyi önlemek için bir engelleme reaktifi ekleyin.

Nöronal farklılaşma belirteçleri için spesifik florofor konjuge antikorlar ekleyin ve inkübe edin, böylece antikorların SGN'leri etiketlemesine izin verin.

Bağlanmamış antikorları çıkarmak için yıkayın ve lamelleri floresan nükleer leke içeren bir montaj ortamı ile monte edin.

Floresan mikroskobu kullanarak, iMOP'ların SGN'lere farklılaştığını doğrulamak için antikor sinyallerini tespit edin.

İlk olarak, yuvarlak cam lamelleri steril 100 milimetrelik bir plakaya yerleştirerek ve% 70 etanole batırarak t