Transgenik Fare Embriyolarından Okülomotor Kesitlerin Ex Vivo Kültürü ve Görüntülenmesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 4:29 dk. • July 8th, 2025
Transgenik bir hamile fare alın, embriyo içeren uterusu cerrahi olarak izole edin ve kalan kanı çıkarmak için yıkayın.
Floresan etiketli motor nöronları içeren embriyoları çıkarın ve bunları çok kuyulu bir plakanın kapağına aktarın.
Erimiş agaroz ekleyin ve embriyoları gömerek jel oluşumunu indüklemek için kapağı soğutun.
Bir floresan mikroskobu altında, okülomotor çekirdekleri ve gözleri bir çizgide hizalayın ve agarozu çizgiye paralel olarak kesin.
Bir embriyoyu bir numune aşamasına sabitleyin ve soğuk bir dilimleme tamponu ile doldurulmuş bir vibratom odasına yerleştirin.
Vibratomu kullanarak, okülomotor çekirdekleri ve gözleri içeren dilimler oluşturun. Çekirdekler, göz hareketini kontrol eden okülomotor sinirleri oluşturur.
Dilimleri, bir kültür ortamı içeren çok kuyucuklu bir plakanın içindeki kültür eklerine aktarın ve inkübe edin.
Bir floresan mikroskobu kullanarak, floresan etiketli okülomotor nöronların aksonları gözlere ulaşmak için uzandığını gözlemlemek için düzenli aralıklarla görüntü alın.
Prosedüre başlamadan önce, ilk olarak, zamanlanmış bir çiftleşmeden embriyonik 10.5 gününde ultrason ile hamileliği onaylayın. Embriyoları toplayın, hamile farenin karnına% 70 etan
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin