Floresanla Aktive Edilen Hücre Sıralaması Kullanılarak Murin Retinal Ganglion Hücrelerinin İzole Edilmesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:10 dk. • July 8th, 2025
Nemli bir hücre süzgecine bir murin retinası yerleştirin ve retina hücrelerini hücre dışı matristen ayırmak için dairesel hareketlerle yumuşatın.
Süzgeci bir toplama tüpüne aktarın.
Hücreleri yıkamak ve toplamak için süzgecin içine bir fosfat tamponu ve serum solüsyonu ekleyin.
Hücreleri yerleştirmek için santrifüjleyin. Süpernatanı atın ve hücreleri bir fosfat tamponu ve serum çözeltisi içinde yeniden süspanse edin.
Hücreler üzerindeki Fc reseptörlerine bağlanan bloke edici antikorlar ekleyin, hedef antikorların spesifik olmayan bağlanmasını önleyin.
Daha sonra, çeşitli hücre tiplerinde spesifik hücre yüzeyi belirteçlerine bağlanan floresan etiketli ve etiketsiz birincil antikorları ekleyin.
Bağlanmamış antikorları çıkarmak için yıkayın.
Etiketlenmemiş birincil antikora bağlanmak için floresan etiketli bir ikincil antikor ekleyin.
Bağlanmamış antikorları çıkarmak için yıkayın.
Etiketli hücrelerin farklı floresan sinyallerini yakalamak ve retinal ganglion hücrelerini çeşitli retinal hücre popülasyonlarından sıralamak için floresanla aktive edilen hücre sıralaması veya FACS gerçekleştirin.
PBS ve FBS ile nemlendirilmiş steril 70 mikronluk naylon süzgecin üzerine 12 retinaya kadar ye
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin