JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:15 dk. • July 8th, 2025
Hücre sağkalımını destekleyen bir Rho-kinaz inhibitörü içeren bir ortamda insan kaynaklı pluripotent kök hücreler veya iPSC'ler içeren çok kuyulu bir plaka ile başlayın.
Ortamı, besinler ve büyüme faktörleri içeren temel bir ortamla değiştirin.
iPSC'lerin öncü hücrelere proliferasyonuna ve farklılaşmasına izin vermek için inkübe edin.
Bu besiyerini fibroblast büyüme faktörleri ve retinoik asit ile takviye edilmiş bir farklılaşma besiyeri ile değiştirin, ardından inkübe edin.
Büyüme faktörleri, öncü hücrelerin mikrovasküler endotel hücrelerine farklılaşmasını kolaylaştırırken, retinoik asit sıkı bağlantı proteinlerinin sentezini destekler.
Hücreleri ayırmak için hücreleri bir enzim-EDTA çözeltisi ile yıkayın ve işlemden geçirin, tek hücreli bir süspansiyon oluşturun.
Hücreleri toplamak ve süpernatanı çıkarmak için santrifüjleyin. Ardından, hücreleri yeni bir farklılaşma ortamında yeniden süspanse edin.
Bu hücre süspansiyonunu, kollajen ve yapışma proteinleri ile kaplanmış çok kuyucuklu bir plakaya tohumlayın.
Hücre yapışmasına izin vermek için inkübe edin, hücreler arasında sıkı bağlantılar oluşturun, beyin mikrovasküler endotel hücrelerine benzer.
İnsan iPSC'lerinden BMEC farklılaş
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin