Fare Embriyo Dorsolateral Telenefalonlarından Hücrelerin İzolasyonu ve Kültürlenmesi

Bir tamponda bir fare embriyosu alın ve beyni izole etmek için kafatasını ayırın.

Beyni kaplayan zarlı tabaka olan meninksleri çıkarın.

Yarım küreleri ayırmak için beyni inceleyin.

Dorsolateral telensefalonları hemisferlerden izole edin ve bir tüpe aktarın.

Dorsolateral telensefalonlar nöronlar ve nöral progenitör hücreler açısından zengindir.

Süpernatanı santrifüjleyin ve çıkarın.

Bir enzim çözeltisi ekleyin. Enzimler doku matrisini parçalayarak hücreleri gevşetir.

Serum içeren bir proliferasyon ortamı tanıtın. Serum proteinleri enzim aktivitesini inhibe eder.

Dokuyu mekanik olarak ayırmak ve bir hücre süspansiyonu oluşturmak için bir pipet kullanın.

İnaktive edilmiş enzimler ve doku kalıntıları içeren süpernatanı santrifüjleyin ve çıkarın.

Proliferasyon ortamındaki hücreleri yeniden süspanse edin.

Hücreleri hücre kültürü substratı kaplı bir mikroplaka üzerine aktarın.

Hücrelerin substrata yapışması için inkübe edin. Besiyeri progenitör hücre proliferasyonunu kolaylaştırır.

Beyinleri 5 ila 10 E14 embriyosundan soğuk diseksiyon ortamı ile bir Petri kabında çıkararak başlayın. Cildi ve kafatasını dikkatlice çıkarmak için forseps kullanın ve beyinleri izole edin. Stereomikroskop altı