Bir Sıçan Omurgasından Primer Dorsal Kök Gangliyon Hücre Kültürü Oluşturulması

Bir sıçan omurgası alın. Yanları boyunca iki kesim ve bir yanal kesim yapın.

Sırt kaslarını ve omurların sırt kısmını çıkarın.

Omuriliği çıkarın.

Bel omurları boyunca bilateral olarak bulunan dorsal kök gangliyonlarını veya DRG'leri tanımlayın.

DRG'ler, glial hücrelerle çevrili nöronlar içerir.

DRG'leri kesin ve bir tabakta toplayın. Dokuyu serumsuz ortamla tekrar tekrar yıkayın.

DRG'leri kollajenaz çözeltisi içeren bir plakaya aktarın ve inkübe edin. Kollajenaz, hücre dışı matrisi bozar.

Tampon ile yıkayınız. Tripsin-EDTA ekleyin ve hücre-hücre bağlantılarını bozmak için inkübe edin, hücreleri gevşetin.

DRG'leri bir tüpe, santrifüje aktarın ve süpernatanı atın.

Dokuyu kültür ortamında yeniden süspanse edin ve hücreleri serbest bırakmak için tekrar tekrar pipetleyin.

Bağlanmayı kolaylaştırmak için hücreleri polimer kaplı bir kültür plakasına iyice aktarın.

Ortamı çıkarın ve inhibitörler ve büyüme faktörleri içeren yeni ortam ekleyin.

İnhibitörler glial hücre proliferasyonunu sınırlarken, büyüme faktörleri nöronal büyümeyi teşvik eder.

Lomber dorsal kök gangliyonlarını iki ila üç haftalık bir sıçanın gövdesinden toplayın. Omurganın kenarları boyunca iki kesim ve lomber omurganın ros