JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:37 dk. • July 8th, 2025
Sonraki işlemler sırasında nöronları korumak için soğuk, serum içeren bir ortamda bir duyusal nöron kümesi olan bir dorsal kök ganglionu veya DRG'yi alın.
Santrifüj, ardından süpernatanı çıkarın.
Sindirim enzimleri içeren bir fosfat tamponu ekleyin ve hafif çalkalama ile inkübe edin.
Enzimler, hücre dışı matrisi veya ECM'yi ve DRG dokusunu ayırarak hücreleri gevşetir.
Enzimleri etkisiz hale getirmek için serum içeren bir ortam ekleyin.
Santrifüj, ardından süpernatanı atın.
DRG'yi yeniden askıya alın ve bir hücre süspansiyonu elde etmek için giderek daha küçük boyutlarda pipetler kullanarak dokuyu mekanik olarak ayırın.
Hücreleri, sığır serum albümininin yoğunluk gradyanı üzerine katmanlayın.
merkezkaç. Nöronlar dibe çökerek bir topak oluşturur.
Doku kalıntısı içeren katmanları atın.
Nöronları bir kültür ortamında yeniden süspanse edin.
Nöronları ECM kaplı bir kültür kabına ekleyin ve inkübe edin.
Ortamı çıkarın ve doğal öldürücü veya NK hücreleri ekleyin.
Ko-kültüre bir ortam ekleyin ve bu hücreler arasındaki etkileşimi inceleyin.
DRG'leri, 10 mililitre buz gibi, takviyeli DMEM ile doldurulmuş 15 mililitrelik konik bir tüpe hasat edin. Daha sonra, preparatı oda sıcaklığında 200 g'd
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin