Meyve Sineği Larva Beyin Eksplantlarının Diseksiyonu ve Montajı

Bir meyve sineği olan Drosophila'nın larvaları ile bir tabak içinde fizyolojik bir tuzlu su çözeltisi içinde başlayın. Solüsyon larvaların susuz kalmasını önler.

Diseksiyon mikroskobu altında, larvaların ön ucunu ağız kancaları ile bulun.

Ön uç, göz disklerini ve merkezi sinir sistemini veya beyin loblarını ve bir ventral sinir kordonunu içeren CNS'yi içerir.

Forseps kullanarak larvaların arka ucunu tutun. Başka bir forseps çifti ile, iç organları çıkarmak için ön ucu çekin.

Göz disklerine bağlı CNS'yi izole etmek için bağırsakları ve bağlı kasları çıkarın.

Beyin eksplantını monte etmek için, ekstrakte edilen dokuyu bir cam slayt üzerindeki bir yağ bariyeri içine alınmış salin solüsyonuna aktarın.

Eksplantın sırt tarafının yukarı baktığından emin olun ve dokuyu bir lamel ile kapatın. Beyin eksplant analiz için hazırdır.

Larva Drosophila'dan beyin toplamak için, diseksiyon mikroskobu altında, bir larva örneğini yerinde tutmak için bir çift 5 numaralı standart uçlu diseksiyon forseps kullanın, diğerini ise göz disklerini, beyin loblarını ve ventral sinir kordonunu koruyarak beyni dikkatlice incelemek için kullanın. Ardından, görüntüleme sırasında numunenin herhangi bir hareketini en aza indirmek için bağlı kasları çıkarın. Tüm beyinler hasat edildiğinde, bir cam slayt üzerine kare bir oda çizmek için vakum yağı kullanın ve odaya 20 mikrolitre harici tuzlu su çözeltisi ekleyin.

Beyinleri odaya aktarmak için forsepsleri kullanın ve beyinlerin pozisyonlarını mikroskop altında, sırt tarafları yukarı bakacak şekilde ayarlayın. Hazneyi bir cam lamel ile örtün ve görüntüleme prosedürü sırasında numunenin sürüklenmesini azaltmak için lamel üzerine hafifçe bastırın.