İndüklenmiş Pluripotent Kök Hücrelerin Nöral Progenitör Hücrelere Farklılaşması

Bir ortamda fare embriyonik fibroblastlarının veya MEF'lerin yapışık bir kültürünü içeren bir mikroplaka alın.

Yapıştırılan MEF'ler, destekleyici bir hücre kültürü mikro ortamı sağlayan bir besleyici katman olarak işlev görür.

Ortamı çıkarın ve insan kaynaklı pluripotent kök hücreleri veya hiPSC'leri, hücre sağkalımını artıran küçük moleküllerle desteklenmiş bir hiPSC ortamına ekleyin.

hiPSC'lerin, hiPSC proliferasyonunu kolaylaştıran büyüme faktörlerini salgılayan besleyici katmana yapışmasına izin vermek için inkübe edin.

Ortamı çıkarın ve hücreleri ayırmak için bir enzim çözeltisi ekleyin. Hücreleri aktarın ve santrifüjleyin, ardından süpernatanı çıkarın ve hiPSC ortamında yeniden süspanse edin.

Hücreleri biyopolimer kaplı bir plakaya aktarın. MEF'lerin yapışmasına izin vermek için kuluçkaya yatırın.

Asılı hiPSC'leri V tabanlı bir mikro plakaya aktarın. Hücreleri santrifüjleyin ve inkübe edin, hücre agregası oluşumunu indükleyin.

Bir farklılaştırma ortamı ile doldurun. Besiyerinin besinleri ve agrega içindeki hücre-hücre etkileşimleri, nöral progenitör hücrelere hiPSC farklılaşmasını kolaylaştırır.

Bu protokol için, besleyici hücreler oluşturmakla başlayın. Bu kültürü oluşturmak