JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:52 dk. • July 8th, 2025
Farklılaştırıcı ortam-1 veya DM-1'de iyi içeren bir nöral progenitör hücre veya NPC agregatları ile başlayın.
Bu NPC'ler, kontrollü koşullar altında DM-1 kullanılarak insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerden veya hiPSC'lerden üretilen nöral soyun öncüleridir.
NPC agregalarını DM-1 içeren bir kuyu içine yerleştirilmiş bir membran ekine aktarın ve fazla ortamı çıkarın.
Ortamı DM-2 olarak değiştirin ve inkübe edin.
DM-2, NPC'lerin farklı nöral hücre tiplerine olgunlaşmasını teşvik eden besinler ve farklılaşma faktörleri sağlar.
Farklılaşmamış NPC'ler, ortamda serum olmadığı için serumsuz embriyoid cisimler veya SFEB'ler olarak bilinen embriyoid cisimlere dönüşür. Bu EB'ler gelişmekte olan bir beynin morfolojisine benzer.
Ek parçayı DM-3 içeren bir kuyuya aktarın.
DM-3, SFEB'lerin bakımı ve büyümesi için gerekli olan büyüme faktörlerini içerir.
SFEB'ler istenen boyuta ulaşana kadar inkübe edin.
Hücrelerin kültürlenmesinden iki hafta sonra, 40 mikron hücre kültürü ekleri ve 1 mililitre DM1 ortamı ile altı oyuklu plakalar hazırlayın. Kültürlenmiş hücreleri eklemeden önce bu plakaları en az dört saat inkübe edin.
Daha sonra, 200 mikrolitrelik geniş ağızlı bir pipet ucu kullanarak, yakla
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin