Tasarlanmış İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerin Fonksiyonel Motor Nöronlara Farklılaşması

Hücre dışı matris kaplı bir plaka üzerinde kültürlenmiş insan kaynaklı pluripotent kök hücre veya iPSC'yi alın.

iPSC'ler, motor nöron farklılaşmasını indükleyen transkripsiyon faktörlerini ifade etmek için genetik olarak modifiye edilmiştir.

Ortamı çıkarın ve kolonileri ayırmak için enzimler ekleyin.

Hücreleri mekanik olarak tek hücreli bir süspansiyona ayırın ve toplayın.

Süpernatanı santrifüjleyin ve çıkarın.

Hücresel apoptozu önleyen bir inhibitör içeren ortamdaki hücreleri yeniden askıya alın.

Hücreleri matris kaplı bir tabağa koyun.

Antibiyotik doksisiklin ve küçük moleküllü inhibitörleri içeren taze farklılaşma ortamı ekleyin.

Doksisiklin, transkripsiyon faktörü ekspresyonunu indüklerken, inhibitörler spesifik sinyal yollarını bloke ederek motor nöron progenitörlerine iPSC farklılaşmasını teşvik eder.

Hücreleri ayırmak için enzimler ekleyin.

Hücreleri toplayın ve mekanik olarak ayırın.

Süpernatanı santrifüjleyin ve atın. Nöronal ortamdaki hücreleri yeniden süspanse edin.

Hücre yapışmasını teşvik etmek için hücreleri yapışma proteini kaplı mikro slaytlar üzerine yerleştirin.

Ortamdaki büyüme faktörleri, motor nöronlara progenitör olgunlaşmasını indükler.

Motor nöron farklılaşm