Name: Rizotomi sonra Dorsal Kök Aksonlar Canlı Görüntüleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-01T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 39 s
Description: Keşfedin, dorsal kök ezilmesi sonrası primer duyu aksonlarının canlı görüntülenmesi için geniş alan floresan mikroskobu ve thy1-YFP transgenik fareler kullanılan bu yöntemi. Sinir bilimi ve rejenerasyon araştırmalarına katkı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dr Alan Tessler yorum ve editoryal yardım için teşekkür ederim. Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüsü, NS062320 tarafından desteklenmiştir.

1. Mikroskop kurmak ve görüntüleme hazırlık <ol><li> Bizim görüntüleme, bir hızlı çekim ve soğutmalı CCD kamera Metamorph yazılımı tarafından kontrol edilen bir Leica MZ16 floresan stereomikroskopta oluşur ayarlayın. </li><li> Termostatik kontrollü bir ısıtma yastığı hazırlayın ve 32,5 ° C, hayvanın vücut ısısını korumak için sırasında ve cerrahi sonrası çıkış ayarlayabilirsiniz. </li><li> 32,5 ° C, ameliyat sırasında omurilik sulama için önceden Sıcak steril Ringer solüsyonu veya yapay beyin omurilik sıvısı (ACSF). </li><li> Ksilizin (8 mg / kg) ve ketamin (120 mg / kg) kokteyl intraperitoneal enjeksiyonu ile hayvan anestezisi. </li><li> Küçük hayvan kesme makineleri ile üst sırt Tıraş ve pamuklu çubuklar, traş alana epilasyon losyonu küçük bir damla yayıldı. Dakikalar sonra,% 70 etanol batırılmış gazlı bez sünger kullanılarak uygulanan losyon çıkarın. </li></ol> 2. Laminektomi ve L5 dorsal kök cerrahi maruz kalma <ol><li> Isıtmalı (32,5 ° C) ped hayvan koyun ve% 70 etanol batırılmış çubuklar ile cilt dezenfekte edin. </li><li> Arka cilt stereomikroskopta parlak alan aydınlatma altında, orta hat insizyonu (3 cm 2) gerçekleştirin. Gerekirse, kanamayı durdurmak için pamuklu çubuklar kullanın. </li><li> Altta yatan bel omurları ortaya çıkarmak için omurilik kas yansıtmaktadır. </li><li> Sağ taraflı hemi-laminektomi küçük rongeurs kullanarak L3-S1 spinal segmentler Açığa. L2 vertebra (2 rostrally kalça iliak düzeyinde L5 vertebra sağ dorsal kısmı (L5 DRG yeri) çıkarırken, lomber ve sakral spinal kord 4-6 segmentleri açığa kısmi laminektomi tarafından oluşturulan son kaburga vertebra kaudal). Ilık steril Ringer solüsyonu ile kavite serpmek. </li><li> Vertebral kolon düzleştirmek için bir destek yastığı (rulo pamuk gazlı bez) hayvan yerleştirin. Maruz alanını genişletmek için geri çekme kancaları kullanın. </li><li> Alternatif olarak, bu noktada (ilk ip anestezik enjeksiyon sonrası yaklaşık 30 dakika, hayvan tam anestezi tutmak için bir ek (0.5x) subkutan enjekte edilmelidir. Gaz anestezi (% 2-4 izofluran 0.5L/MIN oksijen ) 1 saatten daha uzun görüntüleme oturumları sırasında tekrarlanan anesthetization için kullanılabilir. </li></ol> 3. Rizotomi / Dorsal kök ezmek <ol><li> YFP aksonlar (+) etiketli görselleştirmek için floresans uyarma geçin. </li><li> Alt-Q (26ga.) iğne ucu kullanarak, dura L5 dorsal kök (DR) üzerinde küçük bir kesi yaparlar. Ringer çözeltisi ile tekrar tekrar serpmek ve pamuklu çubuklar ile nazikçe temizleyin. </li><li> Ezilmiş olmak site belirleyin ve subdurally bir tarafında ince bir pens eklemek (Dumont # 5). </li><li> 10 saniye için L5 kök medial kısmını elinde forseps yavaşça ama sıkıca kapatın ve forseps yavaşça bırakın. </li><li> Fizyolojik çözeltisi ile tekrar tekrar yıkayın ve pamuklu çubuklar ile nazikçe temizleyin. </li></ol> 4. Görüntü edinimi ve post-op prosedürleri <ol><li> Hem de düşük ve yüksek büyütme ezmek sonra önce sağ ve ezilme sitesi ve DREZ da dahil olmak üzere tüm açık alan birden fazla görüntü elde edin. </li><li> Görüntüler tek bir anlık görüntü veya 30 gün içinde alınan 10 ila 20 kare birden fazla akarsu olarak elde edilen 40-ms maruz kalma süresi. Odak görüntüler daha sonra seçilir ve genel bir montaj daha sonra Photoshop kullanarak oluşturulur. </li><li> Skar oluşumu en aza indirmek için, sıkıca maruz omuriliğin üstünde, ince sentetik matris membran (Biobrane) bir parçası, yapay dura uygulamak. Omuriliğe yapışık böylece maruz omurilik penceresi tam uyacak şekilde parça kesmek için emin olun. </li><li> Steril 5-0 sütür ile kas kapatın ve yara klipler ile orta hat kesi yakın. </li><li> Ringer solüsyonu (0.3-0.5-ml subkutan) enjekte edilir, postoperatif analjezi (0.05 mg / kg) 2 gün süreyle subkutan olarak her 12 saat gibi Buprenorfin yönetmek. </li><li> Bir ısıtma yastığı (34 ° -35 ° C) düzelene kadar hayvan tutun. </li></ol> 5. Tekrarlanan görüntüleme <ol><li> Hayvanın anestezi ve yara klipleri ve dikişlerle çıkarın. </li><li> Yapay dura ve ince sentetik matris membran yamaları çıkarın ve daha sonra yeniden kullanmak için Ringer çözeltisi içeren steril bir tüp içinde saklayın. </li><li> Sub-Q iğne ve ince forseps kıvrık ucu ile birikmiş bağ dokusu skar yavaşça çıkarın. Sıcak Ringer solüsyonu ile sık sık serpmek. </li><li> Ezmek sitesi ve DREZ dahil olmak üzere, ameliyat alanını yeniden ortaya çıkarmak, daha önceki oturumlarda görüntülü YFP + aksonlar taşınmaya ve Bölüm 4 anlatılan işlemleri tekrarlayın. </li></ol> 6. Temsilcisi sonuçları: Biz bir transection yaralanma sonrası yeniden etmedi ise, hemen hemen tüm YFP + aksonlar site üzerinden büyüdü3 gün sonra ezilme yaralanması (Şekil 1) 11. Tipik olarak, ezilme sonraki gün, proksimal güdük aksonlar ve aksonlar uygun hasarlı olduğunu doğruladı ezmek için distal aynı aksonlar, parçalanma / dejenerasyon ölüyor geri dejenerasyon görülmektedir (örneğin, Şekil 1, 3 ve 5 Gün) . Birçok ek kriterler, net bir şekilde ayrılan veya yaralanma kurtarıldı aksonlar rejenere aksonları ayırt etmek için uygulanır. Bunlar aşağıdakiler dahil: (1) yenileyici aksonlar YFP floresan olmayan kısmını bir genişleme + proksimal ve distal dejenerasyon (ezilme sitesi dolumu floresan sitoplazma nedeniyle etiketsiz boşluğu daralması kontrast nedeniyle ezilme sitesi akson gösteriyor (2) aksonlar yaralanma) hayatta; yenileyici aksonlar, daha az parlak, floresan, ve yaralanma hayatta aksonlar daha dalgalı çok ince (3) yenileyici neurites ince ve akson dejenere floresan parçalarının daha loş floresan üzerinden (4) aksonlar hayatta kalan veya ayrılan aksine, yenileyici aksonlar DREZ durdurmak; genişletilmiş ve (5) aksonlar hayatta kalan veya ayrılan aksine, yenileyici aksonlar Ranvier düğümleri sergilemek yoktur. Şekil 1, ezilme sonra hemen dört yüzeysel YFP + aksonlar (renkli oklar A1) gösterir. Üç gün ezmek sonra, dört aksonlar ezmek sitesi (A2) ile büyüyen tek bir neurite uzanır. Beş gün sonra ezilme, neurites stabil kalır ve bu veya başka bir proksimal aksonlar (A3) herhangi ek bir büyüme var. Yozlaşan bir akson (yani, endoneurial tüpler) daha kalın ve parlak floresan parçalarının üzerinden uzun ezmek sitesi geçti ve yenileyici neurites ezmek (yaklaşık 2 3mm / gün) sonra 4 gün gibi erken DREZ az 11 varmak. Bu aksonlar ve ipuçları iki hafta daha (Şekil 2) için her iki ya da üç gün tekrarlanan görüntüleme ileri büyümeye veya geri çekilmiyor yaptığı ortaya, ama hareketsiz kaldı. Sadece gözle görülür bir değişiklik, bazı akson ipuçları ve miller şişme oldu. Bu gözlemler, bu nedenle şaşırtıcı derecede hızlı ve kronik immobilizasyon DREZ yenileyici aksonlar göstermektedir. <img src="/files/ftp_upload/3126/3126fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1: 5 gün boyunca, dorsal kök ezmek yerinde L5 DR YFP + aksonlar tekrarlanan görüntüleme . L5 kök medial kısmı ezilmiş (kırmızı ok ucu) ve günlük 0, 3, ve sonra 5 ezmek görüntülendi. Çarpıldı alanı sağ panelleri (A1-A3) büyütülmüş. <img src="/files/ftp_upload/3126/3126fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2: akson Tekrarlanan görüntüleme DREZ L5 kök ezmek sonra 20 gün içinde geldi Gün 4, üç aksonlar (renkli oklar) DREZ geldi. Bu akson ipuçları aynı yerde kalır ve Gün 7, 9, 13, 15, ve 20 sonraki görüntüleme oturumlarda benzer bir görünüme sahip. Diğer akson ipuçları ve simgesel (yıldız) göreli bir akson ucu Pozisyonlar görüntüleme oturumları arasında akson motilite belirlemek için kullanılır.

<ol><li>Feng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+neuronal+subsets+in+transgenic+mice+expressing+multiple+spectral+variants+of+GFP%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP.</a> Neuron. 28, 41-51 (2000).</li>
<li>Lichtman, J. W., Sanes, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Watching+the+neuromuscular+junction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurocytol%22%5BJournal%5D)">Watching the neuromuscular junction.</a> J Neurocytol. 32, 767-775 (2003).</li>
<li>Bishop, D. L., Misgeld, T., Walsh, M. K., Gan, W. B., Lichtman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axon+branch+removal+at+developing+synapses+by+axosome+shedding%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Axon branch removal at developing synapses by axosome shedding.</a> Neuron. 44, 651-661 (2004).</li>
<li>Balice-Gordon, R. J., Lichtman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((in+vivo+visualization+of+the+growth+of+pre-+and+postsynaptic+elements+of+neuromuscular+junctions+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">in vivo visualization of the growth of pre- and postsynaptic elements of neuromuscular junctions in the mouse.</a> J Neurosci. 10, 894-908 (1990).</li>
<li>Trachtenberg, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+in+vivo+imaging+of+experience-dependent+synaptic+plasticity+in+adult+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Long-term in vivo imaging of experience-dependent synaptic plasticity in adult cortex.</a> Nature. 420, 788-794 (2002).</li>
<li>Pan, F., Gan, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+imaging+of+dendritic+spine+development+in+the+mouse+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Two-photon imaging of dendritic spine development in the mouse cortex.</a> Dev Neurobiol. 68, 771-778 (2008).</li>
<li>Grutzendler, J., Gan, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+imaging+of+synaptic+plasticity+and+pathology+in+the+living+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroRx%22%5BJournal%5D)">Two-photon imaging of synaptic plasticity and pathology in the living mouse brain.</a> NeuroRx. 3, 489-496 (2006).</li>
<li>Kerschensteiner, M., Schwab, M. E., Lichtman, J. W., Misgeld, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((in+vivo+imaging+of+axonal+degeneration+and+regeneration+in+the+injured+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">in vivo imaging of axonal degeneration and regeneration in the injured spinal cord.</a> Nat Med. 11, 572-577 (2005).</li>
<li>Misgeld, T., Nikic, I., Kerschensteiner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((in+vivo+imaging+of+single+axons+in+the+mouse+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">in vivo imaging of single axons in the mouse spinal cord.</a> Nat Protoc. 2, 263-268 (2007).</li>
<li>Davalos, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable+in+vivo+imaging+of+densely+populated+glia%2C+axons+and+blood+vessels+in+the+mouse+spinal+cord+using+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Stable in vivo imaging of densely populated glia, axons and blood vessels in the mouse spinal cord using two-photon microscopy.</a> J Neurosci Methods. 169, 1-7 (2008).</li>
<li>Maio, D. D. i <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((in+vivo+imaging+of+dorsal+root+regeneration%3A+Rapid+immobilization+and+presynaptic+differentiation+at+the+CNS%2FPNS+border%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">in vivo imaging of dorsal root regeneration: Rapid immobilization and presynaptic differentiation at the CNS/PNS border.</a> Journal of Neuroscience. 31, 4569-4582 (2011).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Doğrudan yaşayan fareler Görüntüleme DR rejenerasyon özellikle sonraki görüntüleme oturumlarda birden fazla invaziv cerrahi ve anestezi prosedürleri takip geniş bir alana akson büyümesini izlemek için önemli bir dorsal laminektomi gerektirdiğinden zordur. Çeşitli stratejiler, bu zorlukların üstesinden gelmek için yardımcı oldu. İlk olarak, başarılı bir görüntüleme, anestezi ve kanama süresini en aza indirmek fare mortalite (yaklaşık% 25) azaltılması gereklidir ve titiz post-op bakım. Ölüm, entübasyon veya solunum kesint...

<table border="1"><tbody><tr><th> Reaktifin Adı </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th><th> Yorumlar </th></tr><tr><td> (2-4 aylık, cinsiyet ya) H hattı thy1-YFP </td><td> Jackson Laboratuvarı (Bar Harbor, ME) </td><td> 003782 </td><td></td></tr><tr><td> Xylazine (AnaSed enjeksiyon, steril çözüm) </td><td> Lloyd Laboratuvarları, (Shenandoah, LA) </td><td> 4811 </td><td> 8 mg / kg </td></tr><tr><td> Ketamin (Ketamin hidroklorür enjeksiyon, USP) </td><td> Hospira, Inc (Lake Forest, IL) </td><td> 2051 </td><td> 120 mg / kg </td></tr><tr><td> Buprenorfin (enjektabl Buprenex) (0.05 mg / kg) </td><td> Reckitt Benckiser Pharmaceuticals Inc (Richmond, VA) </td><td> 7571 </td><td></td></tr><tr><td> Küçük hayvan saç kesme makineleri </td><td> Oster Professional (McMinnville, TN) </td><td> 76059-030 </td><td></td></tr><tr><td> Saç kaldırma losyon </td><td> Kilise ve Dwight Co (Princeton, NJ) </td><td> Bebek Yağı ile Nair </td><td></td></tr><tr><td> Tül süngerler </td><td> Fisher Scientific, (Pittsburgh, PA) </td><td> 22-362-173 </td><td></td></tr><tr><td> Pamuklu çubuklar </td><td> Fisher Scientific, (Pittsburgh, PA) </td><td> 14-960-3Ç </td><td></td></tr><tr><td> 1 ml Şırınga </td><td> Becton, Dickson ve Şirket Franklin Lakes, NJ) </td><td> 309602 </td><td></td></tr><tr><td> Subkutan (Sub-Q) iğneler, 26ga. </td><td> Becton, Dickson ve Company (Franklin Lakes, NJ) </td><td> 305115 </td><td></td></tr><tr><td> Bahar makas ve forseps </td><td> Güzel Bilim Araçlar, (Foster City, CA) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 2.5 mm kavisli rongeurs </td><td> Güzel Bilim Araçlar, (Foster City, CA) </td><td> 16221-14 </td><td></td></tr><tr><td> Ringer Enjeksiyonu USP </td><td> B. Braun Medical Inc (Irvine, CA) </td><td> BBR-L7502 </td><td></td></tr><tr><td> Steril serum fizyolojik solüsyonu </td><td> APP İlaç, (Schaumburg, IL) </td><td> 918610 </td><td></td></tr><tr><td> İnce sentetik matris membran (Biobrane) </td><td> Bertek İlaç, (Morgantown, WV) </td><td> 62794-096-251 </td><td></td></tr><tr><td> Yapay dura </td><td> Gore MVP Dura Substitute, WL Gore and Associates, izin vermeme (Flagstaff, AZ) </td><td> 1MVP40 </td><td></td></tr><tr><td> 5-0 ipek sütür </td><td> Ethicon, Inc (Somerville, NJ) </td><td> K-580 </td><td></td></tr><tr><td> Yara klipleri </td><td> Mükemmel - Ets Bruneau, (Burnea Fransa) </td><td> A75 </td><td></td></tr><tr><td> Floresan stereomikroskopta </td><td> Leica Microsystems, (Wetzlar, Almanya) </td><td> MZ16 </td><td></td></tr><tr><td> CCD kamera </td><td> Hamamatsu, (Bridgewater, NJ) </td><td> ORCA-RX2 </td><td></td></tr><tr><td> Sıcaklık Kontrolör </td><td> Dünya Hassas Aletler (Sarasota, FL) </td><td> ATC 1000 </td><td></td></tr><tr><td> Metamorph yazılımı </td><td> Moleküler Aygıtlar, (Sunnyvale, CA) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Photoshop </td><td> Adobe Systems, San Jose, CA </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

rizotomi sonra dorsal kök aksonlar canlı görüntüleme

Live Imaging of Dorsal Root Axons after Rhizotomy

Spinal kök yaralanmalar yaralandı primer duyusal aksonlar, kronik ağrı ve kalıcı duyu kaybı, omurilik içine yeniden başarısız olur. Omuriliğe dorsal kök (DR) akson Rejenerasyon dorsal kök giriş bölgesi (DREZ), merkezi sinir sistemi ve PNS arasındaki arayüzü önlenmiş olur. DREZ az rejenerasyon önlemek için moleküler ve hücresel olayların anlayışımız, sinir hasarı ile ilişkili karmaşık değişiklikler, postmortem analizleri sonucuna çünkü kısmen eksik. Akson rejenerasyonu gibi dinamik hücresel süreçleri, en iyi gerçek-zamanlı olarak olaylar her canlı hayvanın çoklu gözlem yakalama teknikleri ile çalıştı. Bizim seri nöronlar in vivo monitör yeteneği, optik ve fare transgenik devrimci yenilikler dramatik nedeniyle artmıştır . Thy1-GFP transgenik farelerin birkaç satır, nöron altkümelerini genetik olarak farklı floresan renkler etiketli olduğu, bireysel nöronlar in vivo 1 imaged izin verecek. Bu fareler, kas, 2-4 ve 5-7 beyin in vivo görüntüleme için yaygın olarak kullanılan ve statik analizler çözülmesi olamayacağını fizyolojik mekanizmaları yeni bakış açıları sağlamıştır . Ancak son zamanlarda yaşayan omurilik nöron görüntüleme çalışmaları başladı. Lichtman ve arkadaşları ilk kez geniş alan mikroskobu 8,9 ile yaralı dorsal kolon (DC) aksonlar takip ederek kendi fizibilite gösterdi. Multi-foton, derin yerleştirilmiş DC akson in vivo görüntüleme mikroglia ve kan damarlarının 10 başarılı olmuştur. Son birkaç yıl içinde, biz geniş alan mikroskobu ve thy1-YFP farelerin Y hattı kullanılarak DR akson rejenerasyonu izlemek için in vivo görüntüleme uygulanmasında öncülük etmiştir. Bu çalışmalar 11 omurilik içinde DR aksonlar rejenere engellenir neden hakkında bir roman hipotez için bize yol açmıştır. Thy1-YFP farelerin Y doğrultusunda, farklı YFP + aksonlar yüzeysel birkaç aksonlar eş zamanlı olarak takip edilmesine olanak sağlamaktadır konumlandırılmış. Biz DREZ gelen DR aksonlar daha iyi servikal spinal kord daha lomber imaged olduğunu öğrendim. Bu raporda biz yenileyici DR akson başarılı uzun süreli ve tekrarlanan görüntüleme sağlamak için yararlı bulduk çeşitli stratejiler açıklanmaktadır. Bunlar tekrarlanan entübasyon ve solunum kesintisi ortadan kaldırmak yöntemleri, cerrahi ile ilişkili stres ve skar oluşumu en aza indirmek ve fototoksisite olmadan istikrarlı yüksek çözünürlükte görüntüler elde edin.

Bir<em&gt; In vivo</em&gt; Görüntüleme protokolü, dorsal kök ezmek aşağıdaki birincil duyusal aksonlar izlemek için tarif edilir. Prosedürleri geniş alan floresan mikroskopi ve thy1 YFP transgenik fareler kullanan ve akson rejenerasyonu PNS ve akson etkileşimleri CNS arayüzü ile 4 cm üzerinde tekrarlanan görüntüleme izni.

Rizotomi sonra Dorsal Kök Aksonlar Canlı Görüntüleme

Spinal kök yaralanmalarıyla hasar gören primer duyusal aksonlar, omurilik içine yeniden uzanamazlar; bu durum kronik ağrıya ve kalıcı duyusal kayba yol açar. ...

Bu prosedürün genel amacı, spinal kök yaralanmalarından sonra anlamlı bir rejenerasyonu tetiklemenin bir yolunu keşfetmek için dorsal kök rejenerasyonunu incelemektir. Bu işlem, öncelikle sağ L5 dorsal kökünü açığa çıkaran ve spinal kord ile dorsal kökteki YFP etiketli pozitif aksonların görüntülenmesine olanak tanıyan bir spinal hemi laminektomi gerçekleştirilerek sağlanır. Ardından, minimum kanama olduğundan emin olmak için L5 dorsal kökü dikkatlice ezilir.Ardından, lezyondaki hasarlı dorsal kökün konumunu doğrulamak için ezme işleminden sonra ezme bölgesinin görüntüsü alınır. Hasarlı aksonların omuriliğe doğru rejenerasyon kapasitesini belirlemek amacıyla, birkaç farklı zaman noktasında yaralanma bölgesi ve dorsal kök giriş bölgesi görüntülenir. Nihayetinde, rejenerasyon gösteren aksonların hızla immobilize olduğu ve dorsal kök giriş bölgesine (DREZ) girerken durağan kaldığını gösteren sonuçlar elde edilebilir.Bu tekniğin, ölü hayvanlarda görüntüleme gibi mevcut tekniklere göre temel avantajı, bu sistemi canlı bir hayvanda haftalarca, hatta aylarca süren bir zaman dilimi boyunca tekrarlanan şekilde görüntüleyebilmemizdir. İlk olarak, floresan stereo mikroskobun altına termostati

live-imaging-of-dorsal-root-axons-after-rhizotomy

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Kaynak: Cheah, M.,  et al. Duyusal akson rejenerasyonu için bir model olarak dorsal kök ganglion enjeksiyonu ve dorsal kök ezilme yaralanması. J. Vis. Uzm. (2017). Bu video, dorsal kök gangliyonlarına (DRG'ler) viral bir süspansiyon enjekte etmek ve anestezi uygulanmış bir sıçanda dorsal kök ezmesi yoluyla kontrollü bir aksonal yaralanmayı indüklemek için adım adım bir prosedürü göstermektedir. Protokol, DRG'lerin açığa çıkarılmasını, aksonal rejenerasyonu kolaylaştırmak için büyümeyi teşvik...

Dorsal Kök Ganglion Enjeksiyonu ve Dorsal Kök Ezilme Yaralanması Kullanılarak Bir Sıçanda Duyusal Akson Rejenerasyonunun Modellenmesi

Kaynak: Shannonhouse, J.,  et al. İn Vivo Sağlam dorsal kök gangliyonlarındaki primer duyusal nöron ağlarındaki nöronal toplulukların kalsiyum görüntülemesi. J. Vis. Uzm. (2023). Video, transgenik bir farenin dorsal kök gangliyonlarındaki (DRG) nöronal aktiviteyi izlemek için in vivo bir kalsiyum görüntüleme tekniğini göstermektedir. DRG nöronları, kalsiyuma bağlandıktan sonra floresan yoğunluğunu artıran bir kalsiyum indikatörünü ifade eder. Bir arka pençeye uygulanan mekanik veya termal...

Bir farenin sağlam dorsal kök gangliyonlarındaki nöronal toplulukların in vivo kalsiyum görüntülemesi

Periferal sinir sisteminin (PNS) yaralanmadan sonra önemli tamir yeteneğine sahip olmasına rağmen, küçük bu olgu yöneten hücresel ve moleküler mekanizmaları bilinmektedir. Canlı, transgenik zebrafish ve tekrarlanabilir bir sinir kesisi testi kullanarak, sinir dejenerasyonu ve rejenerasyonu sırasında dinamik glial hücre davranışlarını eğitim görebilirsiniz.

Motor Sinir transeksiyonu ve Canlı Zebra balığı Glial Hücre Davranışlarının Time-lapse Görüntüleme

GABAerjik presinaptik inhibisyonu motor ve omurilik ağlarında duyusal sinyal entegrasyon için önemli omurilikteki güçlü bir önleyici mekanizmadır. Altta yatan primer afferent depolarizasyon dorsal kök potansiyelleri (DRP) kaydı ile ölçülebilir. Burada farelerde DRP in vivo kayıt için bir yöntem ortaya koymaktadır.

Dorsal Kök Potansiyel Kayıt By Farelerde Spinal Presinaptik Engellenme Ölçme<em&gt; In Vivo</em

Akson ve miyelin yaralanmalarının dinamiklerini gerçek zamanlı olarak aynı anda görselleştirmek için iki foton uyarımlı hızlandırılmış mikroskopi kullanan bir protokol sunuyoruz. Önerilen bu protokol, yaralanma sonrası merkezi miyelinli akson kaderini etkileyebilecek ve kalıcı klinik sakatlığa katkıda bulunabilecek hem içsel hem de dışsal faktörlerin çalışmasına izin vermektedir.

Bir Ex vivo Lazer kaynaklı Omurilik Felçlileri Modeli Gerçek zamanlı aksonal Dejenerasyon mekanizmaları değerlendirmek için

Bu protokol, duyusal akson rejenerasyonunu incelemek için bir model olarak yetişkin bir sıçanda viral vektör ile bir dorsal kök ganglion (DRG) enjeksiyonunun ve eşzamanlı bir dorsal kök ezilme yaralanmasının kullanımını sunar. Bu model, duyusal akson rejenerasyonunu teşvik etmek için gen terapisinin kullanımını araştırmak için uygundur.

Sırt kök ganglion Enjeksiyon ve Dorsal Kök Duyusal Axon Rejenerasyon Modeli Olarak Ezilme Yaralanması

Elektroporasyon genler çıkarlarının hücrelere teslim etmek için etkili bir yaklaşımdır. Bu yaklaşım içinde vivo yetişkin fare dorsal kök gangliyon (DRG) nöronlar üzerinde uygulayarak, biz axon yenilenme içinde vivoçalışmaya bir modeli açıklar.

Soruşturma memeli Axon rejenerasyon: Vivo Elektroporasyon yetişkin fare Dorsal kök gangliyon

Tek lifli kayıt, merkezi ve periferik sinir sistemleri için geçerli olan etkili bir elektrofizyolojik tekniktir. Bağlı siyatik sinir ile bozulmamış DRG hazırlanması ile birlikte, iletim yetmezliği mekanizması incelenir. Her iki protokol de periferik sinir sisteminin ağrı ile ilişkisini geliştirmek.

İletim Yetmezliği Mekanizmasını İncelemek Için Bağlı Siyatik Sinir ile In Vivo Tek Lifli Kayıt ve Bozulmamış Dorsal Kök Ganglion Kullanımı

Bu protokol, dorsal kök ganglionunun (DRG) cerrahi maruziyetini ve ardından GCaMP3'ü (genetik olarak kodlanmış Ca2+ göstergesi; Yeşil Floresan Protein-Kalmodulin-M13 Protein 3) İpsilateral arka pençeye çeşitli uyaranlar uygularken Pirt-GCaMP3 fareleri kullanılarak nöronal toplulukların Ca2+ görüntülenmesi.

İn Vivo Bozulmamış Dorsal Kök Ganglialarında Primer Duyusal Nöronların Ağlarında Nöronal Toplulukların Kalsiyum Görüntülenmesi

Mevcut protokol, lomber-6 DRG nöron topluluklarının somatik ve viseral uyaranlara tepkilerini ölçmek için in vivo kalsiyum görüntülemeyi ana hatlarıyla belirtir. Farklı uyaranlara yanıt veren nöronlar arasında kapsamlı karşılaştırmalar yapılabilir. Bu protokol, akupunktur gibi viseral ağrı ve somatik stimülasyon mekanizmalarını araştırmak için değerlidir.

In vivo (İn canlı) Dorsal Kök Gangliyon Nöronlarının Somatik ve Viseral Uyaranlara Yanıtının Kalsiyum Görüntülemesi

Bu çalışma, senkron EKG kayıtları ile birlikte in vivo kalsiyum görüntüleme için anestezi uygulanmış farelerde T-DRG'yi ortaya çıkarmak için cerrahi bir manipülasyon sunmaktadır. Bu yöntem, periferik elektriksel sinir stimülasyonu ve torasik viseral organ girdilerinin yanı sıra bunların birincil duyusal düzeydeki etkileşimlerini incelemek için son teknoloji bir araçtır.

Periferik Sinir Stimülasyonunu İncelemek için İn Vivo Torasik Dorsal Kök Gangliyonları (DRG) Kalsiyum Görüntüleme ve EKG Kaydı

Keşfedin, dorsal kök ezilmesi sonrası primer duyu aksonlarının canlı görüntülenmesi için geniş alan floresan mikroskobu ve thy1-YFP transgenik fareler kullanılan bu yöntemi. Sinir bilimi ve rejenerasyon araştırmalarına katkı sağlar.

Rizotomi sonra Dorsal Kök Aksonlar Canlı Görüntüleme

Daha fazla video keşfet