JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 1:58 dk • July 8th, 2025
Bir lamel üzerine tutturulmuş nöronal kanser hücreleri içeren bir hücre kültürü alın ve soğuk koşullar altında koruyun.
Kültür ortamını çıkarın ve artık ortamı ortadan kaldırmak için hücreleri tekrar tekrar soğuk fosfat tamponu ile yıkayın.
Düşük konsantrasyonda iyonik olmayan deterjan ve proteaz inhibitörleri içeren bir lizis tamponu ekleyin.
İyonik olmayan deterjan, lizizi başlatmak için hücre zarını bozar.
Bu arada, proteaz inhibitörleri hücresel proteolitik enzimleri bloke ederek proteinleri enzimatik bozulmadan korur.
Ardından, kısmen parçalanmış hücreleri lamel üzerinden çıkarmak için bir hücre kazıyıcı kullanın.
İçeriği lizis tamponu içeren bir tüpe aktarın.
Soğuk koşullar altında, hücreleri mekanik olarak parçalamak için bir homojenizatör kullanın, tam hücre lizizini ve protein salınımını sağlayın.
Hücre lizatını santrifüjleyin.
Süpernatanı yeni bir tüpe toplayın.
Nöronal tümör hücrelerinden ekstrakte edilen proteinler artık daha fazla analiz için hazırdır.
Protein ekspresyonunun doğrulanması için, transfeksiyondan 48 saat sonra, kültür kaplarını buzun üzerine yerleştirin ve hücreleri PBS ile iki kez yıkayın. Her tabaktaki hücrelere 200 ila 400 mikrolitre lizis tamponu uygulayın ve hücreleri lamellerden çıkarmak için bir hücre kazıyıcı kullanın.
Ayrılan hücreleri her bir plakadan ayrı mikrosantrifüj tüplerine aktarın ve hücreleri buz altında bir homojenizatör ile daha da ayırın. Bir dakika sonra, homojenize hücre parçalarını santrifüjleme ile peletleyin.
Bu makale, lamel üzerinde kültüre edilmiş nöronal kanser hücrelerinden protein ekstraksiyonuna yönelik bir protokolü detaylandırmaktadır. Yöntem, sonraki analizler için protein bütünlüğünü korumak amacıyla soğuk koşullar altında hücre lizisini içermektedir.
Nöronal kanser hücrelerinden protein ekstraksiyonu, nöro-onkoloji ilaç keşfinde hedef doğrulaması ve mekanistik çalışmalar için güvenilir biyokimyasal analizlere olanak tanır. Protokol, kontrollü koşullar altında tekrarlanabilir örnek hazırlamayı destekleyerek sonraki aşamalardaki analizlerdeki değişkenliği azaltır. Bu durum, nöronal tümör modellerinde erken aşama hipotez testlerini ve biyobelirteç değerlendirmesini kolaylaştırır.
Bu yöntem, lider bileşik belirleme aşamalarından önce hedef doğrulama ve analiz geliştirmeyi destekleyerek erken keşif iş akışına uyum sağlar.
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
Son güncelleme: 22 Ağustos 2026