Hipokampal nöronlar kullanılarak proteinlerin çekici veya itici aktivitesinin değerlendirilmesi

0 görüntüleme3:45 dk • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Giriş ve çıkış portlarına bağlı birden fazla küçük kanala sahip bir silikon matris içeren bir çanak ile başlayın.

Kanalları doldurmak için giriş boyunca itici aktiviteye sahip test proteinini enjekte edin.

Kanal alanında protein yapışmasına izin vermek için inkübe edin, test protein bölgeleri oluşturun, ardından yıkayın.

Matrisi çıkarın, kaplanmış alanı çekici aktiviteye sahip bir kontrol proteini ile kaplayın ve inkübe edin.

Bu, kontrol proteininin test proteini bölgeleri arasındaki boş alanlara yapışmasını kolaylaştırır, alternatif çizgili bir desene sahip kontrol proteini bölgeleri oluşturur, ardından yıkayın.

Çizgili alanı kaplamak için laminin ekleyin, ardından yıkayın.

Kaplanmış alanı tek hücreli hipokampal nöron süspansiyonu ile tohumlayın ve inkübe edin.

Test proteini bölgesinde, nöronlar proteinlerle etkileşime girer ve nöronların itilmesine neden olan sinyalleri tetikleyerek bağlanmalarını engeller.

Buna karşılık, kontrol protein bölgesindeki nöron-protein etkileşimleri, büyümelerini ve akson uzantılarını destekleyerek nöronal bağlanmayı teşvik eder.

PBS'de floresan etiketli rekombinant proteinleri hazırlayın. Her şeritli tabak için 25 mikrolitre yapın. Karışımı oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edin. Daha sonra, her bir tabak için, 25 mikrolitre seyreltilmiş protein içeren 22 gauge bir şırınga yükleyin ve matrisin yan tarafındaki küçük delikten enjekte edin.

Proteinlerinizin hastalığa bağlanmasını bozacağı için matrislere hava kabarcıkları enjekte etmekten kaçının.

Şimdi, bulaşıkları bir hücre kültürü inkübatöründe 37 santigrat derecede 30 dakika inkübe edin. İnkübasyondan sonra, her matrisin üst yarığına 300 mikrolitre PBS bırakın. Ardından, bağlanmamış tüm rekombinant proteinleri çıkarmak için PBS'yi her matrisin yanında bulunan küçük bir delikten aspire edin. PBS'yi tam olarak aspire etmeyin çünkü proteinler kurur.

Bu PBS durulamasını toplam üç kez gerçekleştirin. Ardından, matrisi her tabaktan dikkatlice çıkarın. Ardından, tüm çizgili alana hemen yaklaşık 100 mikrolitre kontrol proteini ekleyin ve her tabak üzerinde alternatif bir kaplama oluşturun.

Daha sonra, bulaşıkları 37 santigrat derecede 30 dakika inkübe edin. Bu arada, buz üzerinde, laminini PBS'de mililitre başına 20 mikrogram olarak çözün. 30 dakika sonra, bulaşıkları PBS ile üç kez yıkayın. Ardından, her bir tabağı yaklaşık 100 mikrolitre soğuk laminin ile kaplayın ve bulaşıkları bir saat daha inkübatöre geri koyun.

Bir saat sonra, bulaşıkları tekrar üç kez yıkamak için PBS'yi kullanın. Üçüncü yıkamadan sonra, her yemeğe yaklaşık 150 mikrolitre kültür ortamı ekleyin. Ardından, bulaşıkları bir sonraki ihtiyaç duyulana kadar 37 santigrat derecede% 5'lik bir karbondioksit inkübatörde inkübe edin. Bir hemositometre kullanarak hücreleri sayın ve hazırlanan her şerit plakasında 150 mikrolitre kültür ortamında 10.000 nöron oynatın. Tüm şerit bölgesini kaplayacak şekilde süspansiyonu dikkatlice yerleştirin.

08:20

Nöronlar bir Genetiği kodlanmış doğal olmayan Amino Asit kullanarak Nöronal Protein Optik Kontrol

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:30

Sinaptik vezikül endositoz kültürlü Hipokampal nöronlar içinde ölçme

İlgili videolar

0 Görüntüler

06:53

Axon İlk Segmentlerinin Montajını İncelemek için Birincil Kültürlü Hipokampal Nöronların Kullanımı

İlgili videolar

0 Görüntüler

16:38

Akut Hipokampal Dilimler içinde Synaptically-uyarılmış astroglial ve Nöronal Cevaplarının İkili Elektrofizyolojik Kayıtlar

İlgili videolar

0 Görüntüler

04:10

Sıçan Beyninin Farklı Hücre Altı Bölmelerinde Proteazom Aktivitesinin Ölçülmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

16:33

Immünopresipitasyon ve Açil-Biotin Borsası (ABE) tarafından Yetiştirilmiş Hipokampal Nöronlar Protein Palmitoylation tespiti

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:03

Hipokampal Dilimleri adlı CA1 Nükleer Zenginleştirilmiş Kesirler izolasyonu Synapto-nükleer Messenger Proteinler Etkinliği-bağımlı Nükleer İthalat Okuyacak

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:55

Farelerde Hipokampal Bölgesi Dentate Gyrus dendritik arborization Değerlendirilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:43

Nörogelişimsel Bozukluklar Fare Modeli Mekansal Öğrenme ardından Hipokampal Nöron Faaliyet immünohistokimyasal Görselleştirme

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:11

Çizgili Deneyi Disosiye Hipokampal Nöronlar kullanarak Protein Substrat çekici veya itici Aktivite Eğitim için

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 1 Ağustos 2026