$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Giriş ve çıkış portlarına bağlı birden fazla küçük kanala sahip bir silikon matris içeren bir çanak ile başlayın.
Kanalları doldurmak için giriş boyunca itici aktiviteye sahip test proteinini enjekte edin.
Kanal alanında protein yapışmasına izin vermek için inkübe edin, test protein bölgeleri oluşturun, ardından yıkayın.
Matrisi çıkarın, kaplanmış alanı çekici aktiviteye sahip bir kontrol proteini ile kaplayın ve inkübe edin.
Bu, kontrol proteininin test proteini bölgeleri arasındaki boş alanlara yapışmasını kolaylaştırır, alternatif çizgili bir desene sahip kontrol proteini bölgeleri oluşturur, ardından yıkayın.
Çizgili alanı kaplamak için laminin ekleyin, ardından yıkayın.
Kaplanmış alanı tek hücreli hipokampal nöron süspansiyonu ile tohumlayın ve inkübe edin.
Test proteini bölgesinde, nöronlar proteinlerle etkileşime girer ve nöronların itilmesine neden olan sinyalleri tetikleyerek bağlanmalarını engeller.
Buna karşılık, kontrol protein bölgesindeki nöron-protein etkileşimleri, büyümelerini ve akson uzantılarını destekleyerek nöronal bağlanmayı teşvik eder.
PBS'de floresan etiketli rekombinant proteinleri hazırlayın. Her şeritli tabak için 25 mikrolitre yapın. Karışımı oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edin. Daha sonra, her bir tabak için, 25 mikrolitre seyreltilmiş protein içeren 22 gauge bir şırınga yükleyin ve matrisin yan tarafındaki küçük delikten enjekte edin.
Proteinlerinizin hastalığa bağlanmasını bozacağı için matrislere hava kabarcıkları enjekte etmekten kaçının.
Şimdi, bulaşıkları bir hücre kültürü inkübatöründe 37 santigrat derecede 30 dakika inkübe edin. İnkübasyondan sonra, her matrisin üst yarığına 300 mikrolitre PBS bırakın. Ardından, bağlanmamış tüm rekombinant proteinleri çıkarmak için PBS'yi her matrisin yanında bulunan küçük bir delikten aspire edin. PBS'yi tam olarak aspire etmeyin çünkü proteinler kurur.
Bu PBS durulamasını toplam üç kez gerçekleştirin. Ardından, matrisi her tabaktan dikkatlice çıkarın. Ardından, tüm çizgili alana hemen yaklaşık 100 mikrolitre kontrol proteini ekleyin ve her tabak üzerinde alternatif bir kaplama oluşturun.
Daha sonra, bulaşıkları 37 santigrat derecede 30 dakika inkübe edin. Bu arada, buz üzerinde, laminini PBS'de mililitre başına 20 mikrogram olarak çözün. 30 dakika sonra, bulaşıkları PBS ile üç kez yıkayın. Ardından, her bir tabağı yaklaşık 100 mikrolitre soğuk laminin ile kaplayın ve bulaşıkları bir saat daha inkübatöre geri koyun.
Bir saat sonra, bulaşıkları tekrar üç kez yıkamak için PBS'yi kullanın. Üçüncü yıkamadan sonra, her yemeğe yaklaşık 150 mikrolitre kültür ortamı ekleyin. Ardından, bulaşıkları bir sonraki ihtiyaç duyulana kadar 37 santigrat derecede% 5'lik bir karbondioksit inkübatörde inkübe edin. Bir hemositometre kullanarak hücreleri sayın ve hazırlanan her şerit plakasında 150 mikrolitre kültür ortamında 10.000 nöron oynatın. Tüm şerit bölgesini kaplayacak şekilde süspansiyonu dikkatlice yerleştirin.