Bir Mikroakışkan Çip İçinde Sıçan Hipokampal Nöronlarının Floresan İmmün Boyanması

Sıçan hipokampal nöronları içeren bir mikroakışkan çip alın.

Çip, nöronları etkili bir şekilde bölümlere ayıran ve somatik ve aksonal bölgeleri izole eden bölmeler mikro oluklarla bölünmüş somatik ve aksonal rezervuarlara sahiptir.

Ortamı çıkarın ve formaldehit ekleyin. Nöronları sabitlemek ve yapılarını korumak için kuluçkaya yatırın.

Fazla formaldehiti çıkarın ve tampon ile yıkayın. Ardından, nöronlara nüfuz etmek için bir deterjan ekleyin.

Spesifik olmayan bağlanma bölgelerini bloke etmek için deterjanı bir bloke edici solüsyonla değiştirin.

Bloke edici çözeltiyi çıkarın ve sinaptik veziküller üzerindeki ayrılmaz zar proteinleri olan spesifik nöronal sinaptik belirteçlere bağlanan birincil antikorlarla inkübe edin.

Bağlanmamış antikorları çıkarın ve tampon ile yıkayın.

Sinaptik belirteçleri hedefleyen birincil antikorlara bağlanan florofor etiketli ikincil antikorlarla inkübe edin.

Bağlanmamış ikincil antikorları çıkarın ve tampon ile yıkayın.

Konfokal bir mikroskop altında, floresan nöronal sinaptik belirteçleri görselleştirmek için çipi görüntüleyin.

Floresan immün boyamaya başlamak için, iç bölmeleri nemli tutarak ortamın çoğunu çipten çıkarın. Hemen, aksonal ve somatik bölme