JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 4:45 dk. • July 8th, 2025
Polimer kaplı cam tabanlı bir tabakta sıçan birincil kortikal nöronlarını alın.
Hücresel yapıları korumak için nöronları paraformaldehit ile sabitleyin.
Fazla paraformaldehiti yıkayın.
Hücrelere nüfuz etmek için iyonik olmayan bir deterjan ekleyin.
Hücrelere, yapısal protein filamentli aktini veya F-aktini hedef alan yeşil bir floresan leke uygulayın.
Fazla lekeyi çıkarın.
Spesifik olmayan antikor bağlanmasını önlemek için bir bloke edici ajan uygulayın.
Dendritik proteinleri hedef alan birincil antikorlarla inkübe edin.
Bağlanmamış antikorları çıkarın.
Birincil antikorlara bağlanmak için kırmızı florofor konjuge ikincil antikorlar ekleyin. Fazla antikorları yıkayın.
Çekirdekleri boyamak için floresan bir boya uygulayın. Bağlanmamış boyayı çıkarın.
Florofor fotoağartmayı önlemek için bir antifade reaktifi ekleyin.
Floresan mikroskobu kullanarak nöronların görüntülerini yakalayın.
Etiketli dendrit içinde F-aktin açısından zengin bir bölge tanımlayın.
Yazılımı kullanarak, F-aktin punktasını veya noktalarını sayın ve F-aktin yoğunluğunu hesaplamak için dendritin uzunluğunu manuel olarak izleyin.
Hücreleri oda sıcaklığında 15 dakika boyunca% 4 paraformaldehit ile sabitleyin, ardından i
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin