Fare Primer Serebellar Granül Nöronlarında Nöronal Hasarın Modellenmesi

Fare birincil serebellar granül nöronlarının bir kültürü ile başlayın.

Yüksek konsantrasyonlarda N-metil-D-aspartat veya uyarıcı bir nörotransmitter reseptör agonisti olan NMDA ve bir ko-agonist olan glisin ekleyin. Kültürü kuluçkaya yatırın.

NMDA ve glisin, NMDA reseptörleri üzerindeki ilgili bölgelerine bağlanarak aşırı uyarılmaya yol açar ve büyük bir kalsiyum iyonu akışına neden olur.

Artan hücre içi kalsiyum, hücre zarı fosfolipidlerini bozan ve zar hasarına neden olan kalsiyuma bağımlı fosfolipazları aktive eder.

Ek olarak, hücre içi kalsiyum, hücresel proteinleri bozan proteazları aktive eder.

Yüksek kalsiyum seviyeleri ayrıca mitokondriyal strese ve parçalanmaya neden olarak reaktif oksijen türlerinin veya ROS'un salınmasına ve oksidatif strese neden olur.

Ayrıca, hücre içi kalsiyum, ROS ile birlikte DNA hasarına neden olan ve sonuçta nöronal ölümle sonuçlanan DNazları aktive eder.

Sinyal kaskadını durdurmak için ortamı NMDA ve glisin içermeyen taze ortamla değiştirin.

NMDA'nın neden olduğu nöronal hasar modeli daha fazla analiz için hazırdır.

NMDA ile nöronal eksitotoksisiteyi indüklemek için, in vitro yedi gün sonra, serebellar granül nöronlarını bir saat boyunca 100 mikromolar NMDA ve 10 mikromolar glisin ile tedavi edin. Daha sonra, besiyerini hiçbir işlem görmeden paralel kültürlerden şartlandırılmış besiyeri ile değiştirin. Bu konsantrasyon, tedaviden 24 saat sonra% 50 hücre ölümü ile sonuçlanır.