Beyin Dokusu Ekstraktından Amiloid Fibrillerin İzolasyonu
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 4:38 dk. • July 8th, 2025
Amiloid olmayan proteinler ve çözünmeyen bir protein agregatı olan amiloid fibrilleri içeren bir fare beyin dokusu ekstresi alın.
Katı sükroz ekleyin ve karıştırın, çözeltinin yoğunluğunu artırın.
Daha yoğun proteinleri döküntülerden ayırmak için aktarın ve santrifüjleyin.
Süpernatanı atın, peleti daha yüksek bir sükroz konsantrasyon tamponunda yeniden süspanse edin, karıştırın ve santrifüjleyin.
Birkaç amiloid fibril içeren üst tabakayı yeni bir tüpte toplayın, bir yıkama tamponu ekleyin ve karıştırın.
Şimdi, orta tabakayı atın ve amiloid fibrillerle zenginleştirilmiş peleti, maksimum izolasyon için üst tabaka fraksiyonunu içeren tüpe aktarın.
Kombine fraksiyonları santrifüjleyin ve süpernatanı atın. Bir sindirim tamponu ekleyin ve yalnızca amiloid olmayan proteinleri parçalamak için inkübe edin.
Süpernatanı santrifüjleyin ve çıkarın. Artık sindirilmiş proteinleri çıkarmak için peleti yıkayın.
Peletleri, kalan amiloid olmayan proteinleri çözündüren deterjan içeren sakaroz bazlı bir çözündürme tamponunda yeniden süspanse edin.
Santrifüj, süpernatanı çıkarın ve izole edilen amiloid fibrilleri yeniden askıya alın.
Altı ila sekiz seramik boncuk ve taze hazırlanmış buz gibi soğuk homoj
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin