JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 2:59 dk • July 8th, 2025
Görselleştirmeye izin veren, gelişmiş bir yeşil floresan proteini ifade etmek için genetik olarak tasarlanmış bir murin sitomegalovirüsü süspansiyonu alın.
Süspansiyonu ekli bir iğne ile bir şırıngaya yükleyin.
Ardından, bir fare yavrusunu buzun üzerine koyarak uyuşturun.
Yavrunun kafasındaki enjeksiyon bölgesini belirleyin.
İğneyi, beyindeki lateral ventriküle, beyin omurilik sıvısına veya BOS dolu boşluğa ulaşana kadar kafatası yüzeyine dik olarak sokun.
Süspansiyonu lateral ventriküle enjekte edin.
Yavrunun iyileşmesine izin verin.
Enjekte edilen virüs ventriküler BOS boyunca dolaşır ve marjinal alanın ependimal hücrelerine ve koroid pleksusun epitel hücrelerine ulaşır.
Virüs bu hücreler üzerindeki yüzey reseptörlerine bağlanır, içselleşir, replikasyona uğrar ve hücreden hücreye yayılır, koroid pleksus, marjinal alan ve subventriküler bölgede akut bir enfeksiyon oluşturur.
10 mikrolitrelik bir şırıngayı ve 27 gauge iğneyi %70 alkolle sterilize ederek başlayın. Ardından, şırınganın pistonunu dikkatlice çekerek 5 mikrolitre murin sitomegalovirüs enjeksiyon solüsyonu veya floresan mikroboncuk iğneye yükleyin.
Bir P0.5 yenidoğan faresini üç ila dört dakika boyunca buz üzerine koyarak uyuşturduktan ve hareketsiz hale getirdikten sonra, anestezi derinliğini belirlemek için ayak parmağını kıstırma yanıtı yöntemini kullanın. Anestezi uygulanmış fare üzerindeki enjeksiyon bölgesini, sagital sütürün yaklaşık 0.7 ila 1.0 milimetre lateralinde ve yenidoğan bregmasından 0.7 ila 1.0 milimetre kaudal bir yerde toksik olmayan bir laboratuvar kalemi ile işaretleyin. Bu diyagram siteyi daha ayrıntılı olarak gösterir.
Referans olarak, iğnenin ucundan 2 milimetre uzakta toksik olmayan bir işaretleyici ile işaretleyin. Daha sonra, iğneyi 2 milimetre derinliğinde, işaretli enjeksiyon bölgesinde kafatası yüzeyine dik olarak yerleştirin. Daha sonra 5 mikrolitre murin sitomegalovirüsünü kafa derisini açmadan lateral ventriküle yavaşça enjekte edin.
Başka bir fare grubunda, aynı yöntemle floresan mikro boncuklar içeren 5 mikrolitrelik bir çözelti enjekte edin. Enjeksiyondan sonra, geri akışı önlemek için iğnenin 10 ila 20 saniye yerinde kalmasına izin verin. Ardından iğneyi yavaşça çıkarın. Enjekte edilen hayvanların, hareket ve genel tepki geri gelene kadar ılık bir kapta 5 ila 10 dakika iyileşmesine izin verin.