JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 4:08 dk. • July 8th, 2025
Farklı serebellar nöron tiplerini içeren sabit serebellar organoid bölümleri ele alalım.
Kalan gömme ortamını çıkarmak için tampondaki bölümleri yıkayın.
Kalıntı reaktif bölgelerin fiksasyonunu engellemek için glisin içinde inkübe edin ve immün boyama sırasında spesifik olmayan bağlanmayı azaltın.
Hücrelere nüfuz etmek için iyonik olmayan bir deterjan ekleyin.
Tampon ile yıkayın, fazla deterjanı çıkarın.
Şimdi slaytı kurutun. Doku kurumasını önlemek için tamponla ıslatılmış kağıtla bir immün boyama kabına aktarın.
Nöronlar üzerindeki spesifik olmayan bölgelere bağlanan bir engelleme çözümü uygulayın.
Engelleme çözümünü çıkarın. Serebellar nöronlar içindeki hedef antijenlere bağlanan primer antikorlarla inkübe edin.
Tampon ile yıkayın, bağlanmamış antikorları çıkarın.
Antijene bağlı primer antikorları bağlamak için florofora bağlı ikincil antikorlarla inkübe edin.
Daha sonra, bağlanmamış antikorları çıkararak tampon ile yıkayın.
Hücre çekirdeğini lekelemek için bir boya ekleyin.
Floresan mikroskobu kullanarak, serebellar nöronlarda ifade edilen ve organoid olgunlaşmayı gösteren belirteçleri görselleştirin.
Organoid bölümleri içeren mikroskop slaytlarını 50 mililitre 1X PBS ile beş d
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin