JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 5:20 dk. • July 8th, 2025
Vahşi tip ve mutant Drosophila beyinlerini bir fiksatif ve bir deterjan içeren bir çözeltiye yerleştirin. Hafifçe sallanarak kuluçkaya yatırın.
Fiksatif, doku morfolojisini korurken, deterjan hücre zarlarını geçirgenleştirir.
Beyinlerin yerleşmesine izin verin, ardından çözeltiyi çıkarın.
Mendilleri bir tampon ile yıkayın.
Spesifik olmayan antikor bağlanmasını önlemek için bir engelleme solüsyonu ekleyin.
Çözeltiyi çıkarın ve beynin mantar gövdesinde veya MB nöronlarında aksonal gelişimi düzenleyen spesifik bir proteini hedefleyen birincil antikorlar ekleyin.
Antikor bağlanmasını teşvik etmek için kuluçkaya yatırın.
Bağlanmamış antikorları çıkarmak için tamponla yıkayın.
Primer antikorları hedef alan florofor konjuge sekonjene sekonder antikorlarla inkübe edin.
Bağlanmamış antikorları çıkarmak için tekrar yıkayın, ardından beyinleri bir montaj ortamında yeniden süspanse edin.
Beyinleri bir köprü kızağına monte edin ve onları bir floresan mikroskobu altında görselleştirin.
Vahşi tiple karşılaştırıldığında, mutant beyinler, aksonal yanlış projeksiyonlar ve eksik MB lobları ile kusurlu bir fenotip sergiler.
Mikroskop altında, aynı genotipte 10 ila 15 disseke beyni, PTN içinde seyrelti
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin