JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 2:28 dk • July 8th, 2025
Anestezi uygulanmış zebra balığı larvalarını agaroz jeli ile kaplı bir tabağa alın ve beynin enjeksiyon için yukarı baktığından emin olun.
Gelişmekte olan beyindeki sıvı dolu boşluklar olan beyin ventriküllerini görselleştirmek için çanağı mikroskop altına yerleştirin.
Bir bağışıklık tepkisini tetiklemek için bir bakteri bileşeni olan lipopolisakkarit veya LPS çözeltisi içeren bir mikroenjeksiyon iğnesi alın.
İğneyi, nöronları ve yerleşik bağışıklık hücrelerini, özellikle mikroglia'yı içeren bir bölge olan beyin tektumunun üzerine yerleştirin.
Beyni iğne ile delin ve LPS solüsyonunu ventriküle enjekte edin.
Çevreleyen dokudaki mikroglia, toll benzeri reseptörler aracılığıyla LPS'ye bağlanır.
Bağlanma, bölgeye nötrofilleri toplayan ve nöroinflamasyona yol açan pro-inflamatuar sitokinlerin salınımını tetikler.
Nötrofiller, reaktif oksijen türlerinin patlamalarını üretir ve proteolitik enzimleri serbest bırakarak nöronal ölümle sonuçlanır.
Nöroinflamasyonun neden olduğu larvaları, aşağı akış tahlilleri için korumak üzere bir kültür ortamına aktarın.
Mikromanipülatörü, mikroenjeksiyon aparatının iğne ucu, yüksek büyütmede larvalarla aynı görüş alanında olacak şekilde ayarlayın. Bir mikrodalga kullanarak çift damıtılmış suda% 2'lik bir agaroz çözeltisini eritin. Erimiş agarozu plastik bir tabağa dökün. Anestezi uygulanmış larvaları %2 agaroz kaplı plastik bir kabın merkezine taşımak için plastik bir transfer pipeti kullanın.
İğne erişimi için monte edilmiş larvaları beyin tarafı yukarı bakacak şekilde yönlendirin. Mikroskobun büyütme oranını, zebra balığının beyin ventrikül yapısı görüş alanında net bir şekilde görüntülenecek şekilde ayarlayın. İğneyi dikkatlice beyin tektumunun üzerine yerleştirin. Beyin bölgesini %70 etanol ile temizleyin ve zebra balığı beyninin derisini mikromanipülatörü kullanarak iğne ucuyla yavaşça delin.
Bir nanolitre 1X PBS veya farklı konsantrasyonlarda lipopolisakkarit çıkarmak için ayak pedalına basın. Enjeksiyondan hemen sonra larvaları temiz bir E3 ortamına aktarın.