Fare Serebellar Granül Nöronlarında Reaktif Oksijen Türlerinin Neden Olduğu Nöronal Ölümün Modellenmesi

Fare birincil serebellar granül nöronlarının bir kültürünü ele alalım.

Hidrojen peroksit, reaktif bir oksijen türü veya ROS içeren ortam ekleyin ve kısa bir süre inkübe edin.

Hidrojen peroksit hücrelere yayılır ve oldukça reaktif serbest radikallere dönüştürülür.

Bu radikaller, hücre zarının bütünlüğünü tehlikeye atarak lipid peroksidasyonunu indükler.

Ek olarak, radikaller hücresel proteinlerde oksidatif modifikasyonlara neden olarak işlevlerini bozar.

Ayrıca, DNA kırılmalarına neden olarak genomik kararsızlığa yol açarlar.

Radikaller ayrıca mitokondri de dahil olmak üzere hücre içi organellerde oksidatif hasara neden olur.

Buna karşılık, hasarlı mitokondri, apoptotik proteaz aktive edici faktör-1'e bağlanan, apoptozom oluşumunu ve pro-kaspaz-9'un aktif kaspaz-9'a dönüşümünü tetikleyen sitokrom c salgılar.

Kaspaz 9, cellat kaspazlarını aktive eder, hücresel proteinleri daha da parçalar ve apoptotik nöronal ölüme yol açar.

Sinyal kaskadını durdurmak için ortamı yeni, hidrojen peroksit içermeyen ortamla değiştirin.

ROS'un neden olduğu hücre ölümü için, nöronları beş dakika boyunca 75 ila 100 mikromolar arasında hidrojen peroksit ile tedavi edin. Beş dakika sonra, paralel kültürlerden koşullandırılmış ortama geçirin.

Hidrojen peroksitin kararsızlığı nedeniyle, konsantrasyon 24 saat sonra %50 ila %70 hücre ölümüne neden olacak bir seviyeye optimize edilmelidir. Bu konsantrasyon genellikle 75 ila 100 mikromolar arasındadır.