JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:59 dk. • July 8th, 2025
Bir timidin analoğu olan EdU ile etiketlenmiş çoğaltılmış nöral kök hücreler de dahil olmak üzere nöral hücreler içeren sabit fare beyin bölümlerini alın.
Çözeltinin yayılmasını önlemek için bölümleri hidrofobik bir işaretle ana hatlarıyla belirtin.
Dokuyu geçirgen hale getirmek için bir deterjan ekleyin. Fazla deterjanı çıkarmak için yıkayın.
EdU'yu etiketlemek için bir florofor ekleyin. Fazla floroforları çıkarın.
Bir floresan mikroskobu kullanarak, EdU etiketli hücrelerin uygun şekilde boyandığını onaylayın.
Spesifik olmayan antikor bağlanmasını önlemek için proteinler içeren bir bloke edici tampon uygulayın. Fazla proteinleri çıkarın.
Nöral kök hücrelerdeki spesifik proteinlere bağlanan birincil antikorlarla inkübe edin. Bağlanmamış antikorları çıkarın.
Birincil antikorları bağlamak için florofor konjuge ikincil antikorlar ekleyin. Bağlanmamış antikorları yıkayın.
Çekirdekleri bir boya ile boyayın ve fazla boyayı çıkarın.
Hidrofobik işareti çıkarın, montaj ortamı uygulayın ve bir lamel yerleştirin.
Konfokal bir mikroskop kullanarak, etiketli nöral kök hücreleri görselleştirmek için bölümleri gözlemleyin.
Doku bölümlerini timidin analoğu ile boyamak için, doku bölümlerini sitrat
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin