Mikroglia'yı Vekil Biyosensör Olarak Kullanarak Nöronlarda Nanopartikül Kaynaklı Toksisitenin Belirlenmesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:51 dk. • July 8th, 2025
Ortam içeren çok kuyucuklu bir plakada mikroglial kültürler alın.
Test kuyusundaki ortamın yarısını gümüş nanopartiküller içeren ortamla ve kontrol kuyusundaki ortamla değiştirin. Kuluçkaya yatmak.
Mikroglia, nanopartikülleri içselleştirir, aktive olur ve proinflamatuar sitokinleri serbest bırakır.
Araç ortamını ve bu sitokinleri içeren şartlandırılmış ortamı toplama tüplerine takılan filtrelere aktarın.
Sitokinleri koruyarak nanopartikülleri çıkarmak için santrifüjleyin.
Filtreleri yeni toplama tüplerine ters çevirin, santrifüjleyin ve ortamı toplayın. Yeni ortam ekleyin.
Sonra, hipotalamik nöronal kültürleri alın.
Kontrol kuyusu ortamının yarısını araç ortamıyla ve test kuyusu ortamını şartlandırılmış ortamla değiştirin. Kuluçkaya yatmak.
Sitokinler, hipotalamik nöronlar üzerindeki reseptörlere bağlanarak nöronal ölümü indükleyen sinyal yollarını aktive eder.
Resazorin ekleyin ve inkübe edin.
Canlı hücrelerde, dehidrojenaz enzimleri zayıf floresan resazurin'i floresan resorufin'e indirger.
Floresanı ölçün.
Azalan floresan, artmış hipotalamik nöronal ölümü gösterir ve bu da nanopartikül kaynaklı nörotoksisiteyi düşündürür.
Başlamak için, her bir plaka kuyusundan 200 mikrolitre süp
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin