Bir Fare Modelinde Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit Oluşumu

Miyelin türevi peptitleri, anestezi uygulanmış bir farenin periferik lenf düğümlerinin yakınında bir adjuvan ile enjekte edin.

Peptit-adjuvan konjugatlar, peptitleri tanıyan ve işleyen antijen sunan hücreleri veya APC'leri aktive eder.

APC'ler daha sonra lenf düğümlerine göç eder ve otoreaktif T hücrelerini aktive eder.

Boğmaca toksinini periyodik olarak intraperitoneal olarak enjekte edin, bu da endotel hücreleri arasındaki sıkı bağlantıları bozar ve kan-beyin bariyeri geçirgenliğini arttırır.

Otoreaktif T hücreleri kanda dolaşır ve beyin dokusuna girmek için kan-beyin bariyerini geçer.

Bu hücreler miyelin kılıfı üzerindeki peptitleri tanır ve sitokinleri serbest bırakır.

Bu sitokinler bölgeye makrofajları ve B hücrelerini alır.

Makrofajlar, miyelin üreten oligodendrositlere zarar veren reaktif oksijen türlerini serbest bırakırken, B hücreleri T hücreleri ile etkileşime girer, aktive olur ve miyelin kılıfını hedef alan otoantikorlar üretir.

Bu, sinir iletimini bozan demiyelinizasyona yol açar.

Fare kuyruğunu kaldırın; kademeli bir düşüş, otoimmün ensefalomiyelit veya EAE'nin başlangıcını işaret eden sinir hasarını gösterir.

Bu prosedüre, metin protokolünde açıklandığı gibi belirli patojen içermeyen koşullarda barındırılan C57BL / 6 farelerinin anestezisi ile başlayın. Anestezi uygulanmış fareyi bir elinizle sabitleyin ve kasık lenf düğümlerine yakın bir şekilde arka bacak kanatlarının her birine deri altından tam floresan adjuvan emülsiyon içinde 30 mikrolitre MOG peptidi enjekte edin.

Şimdi, fareyi karnına yerleştirin ve 20 mikrolitre MOG peptit emülsiyonu kuyruk kökünde hem sol hem de sağda bulunan yumuşak yağ dokusuna enjekte edin. Ayrıca, farenin boynuna küçük bir damla emülsiyon enjekte edin. Fareye intraperitoneal olarak 100 mikrolitre boğmaca toksin solüsyonu enjekte edin. Bağırsağa enjeksiyonu önlemek için farenin başını vücut merkezinin altında tutun.

Beklenen klinik hastalığa dayanmadan önce farelere daha yüksek enerji içerikli yiyecekler sağlamak için bakım diyetini üreme diyetine değiştirin. İlk tedaviden 48 saat sonra boğmaca toksini enjeksiyonunu tekrarlayın.

Her sabah kafeslerin içine bakarak EAE farelerinin sağlık durumunu kontrol edin. Her öğleden sonra EAE farelerini puanlayın. EAE deneyine dahil olan her bir fareyi kafesten çıkarın ve kuyruğunun tonusu olup olmadığını kontrol edin.

Kuyruğu parmağınızla yukarı doğru hareket ettirin. Sağlıklı bir fare kuyruğunu yukarıda tutacaktır. Klinik EAE başlamışsa, kuyruk tonusu kuyruğun kademeli olarak düşmesiyle daha düşük görünür olacaktır. Sonunda, fare kuyruğunu hiç kaldıramayacaktır.