Bir EAE Fare Modelinde Floresan Boyalar Kullanılarak Kan-Beyin Bariyeri Bozulmasının Belirlenmesi

Büyük bir dekstran zincirine bağlı yeşil floresan boya içeren bir çözelti ile başlayın. Ardından, küçük bir dekstran zincirine bağlı bir kırmızı boya çözeltisi ekleyin.

Boyaları iyice karıştırın ve bir şırıngaya alın.

Bu boya karışımını, gözün arkasındaki bir damar olan retro-orbital sinüs yoluyla anestezi uygulanmış bir fareye intravenöz olarak enjekte edin.

Bu fare deneysel otoimmün ensefalomiyelit veya EAE'den muzdariptir.

Bu durumda, kan-beyin bariyeri, beynin kan damarlarının endotel hücreleri arasındaki boşluklarla zayıflamış sıkı bağlantılarla bozulur.

Farenin tamamen uyanmasına ve hareketliliğini yeniden kazanmasına izin verin, böylece boyaların dolaşmasını sağlayın.

Küçük dekstran zincirine sahip kırmızı boya, küçük boşluklardan beyin dokusuna kolayca yayılırken, büyük dekstran zincirine bağlı yeşil boya, hasar şiddetli ise yayılır.

Beyin dokusundaki her bir floresan boyanın miktarı, kan-beyin bariyeri bozulmasının derecesi ile ilişkilidir.

Dekstran stok çözeltileri hazırlamak için, 10 miligram üç kilodalton Dextran Texas Red'i 500 mikrolitre% 0.9 sodyum klorür çözeltisi içinde ve 5 miligram 10 kilodalton Dextran AlexaFluor 488'i 250 mikrolitre% 0.9 sodyum klorür çözeltisi içinde çözün.

Dekstran çalışma çözeltisi için, enjeksiyondan hemen önce, 55 mikrolitre 10 kilodalton Dextran AlexaFluor 488 stok çözeltisini bir parça sızdırmazlık filmi üzerine pipetleyin, ardından 55 mikrolitre üç kilodalton Dextran Texas Red stok çözeltisi ekleyin. 100 mikrolitreyi tek kullanımlık ince bir şırıngaya karıştırın ve toplayın.

Ardından, anestezi uygulanmış bir fareyi masanın üzerine yanal pozisyonda yerleştirin. Fare uyanmadan önce fareye intravenöz olarak 100 mikrolitre floresan izleyici enjekte edin. İzleyicinin 15 dakika boyunca dolaşmasına izin verin.