JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 4:04 dk. • July 8th, 2025
Bir tamponda kimyasal olarak sabitlenmiş vahşi tip ve transgenik Drosophila torasları ile başlayın.
Transgenik toraklarda, dorsal longitudinal kasların nöromüsküler kavşakları, nörodejenerasyonu indükleyen mutant bir proteini eksprese eden nöronlar içerir.
Tamponu çıkarın ve bisection sırasında doku hasarını önlemek için torasları hızlı dondurun.
Taze tampon ekleyin ve torasları diseksiyon tabaklarına aktarın.
Toraks ventral tarafı yukarı gelecek şekilde konumlandırın ve orta hattı ortaya çıkarmak için sinir hücresi kümelerini çıkarın.
Hemitoraces elde etmek için orta hat boyunca ikiye bölün.
Fazla dokuyu çıkarın.
Membranları geçirgen hale getirmek ve spesifik olmayan antikor bağlanmasını önlemek için hemitorasları bir bloke edici tampon içinde inkübe edin.
NMJ nöronlarında ve kas aktin filamentlerinde eksprese edilen bir glikoproteini hedefleyen florofor konjuge antikorlar ekleyin.
Bağlanmamış antikorları çıkarın.
Hemitrokesleri bir köprü kızağı üzerine yerleştirin, montaj ortamı ekleyin ve dokuları monte edin.
Mikroskop altında görselleştirin.
Vahşi tiple karşılaştırıldığında, mutantlar, nörodejenerasyonu gösteren azalmış nöronal lekelenme gösterirken, kaslar bozulmamış floresan
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin