İnsan Embriyonik Kök Hücrelerinden Dopaminerjik Nöronal Organoidlerin Üretilmesi

İnsan embriyonik kök hücrelerini veya hESC'leri hücre dışı matris kaplı bir şişede alın.

Ortamı bir nöral indüksiyon ortamı ile değiştirin ve inkübe edin, hESC'leri nöral progenitör hücre veya NPC kolonilerine farklılaştırın.

Kolonileri ayırmak için enzimatik çözelti ekleyin.

Santrifüjleyin, süpernatanı çıkarın ve NPC farklılaşmasını desteklemek için büyüme faktörleri içeren bir indüksiyon ortamında hücreleri yeniden süspanse edin.

Üç boyutlu nöroküreler oluşturmak için hücre süspansiyonunu ters piramidal şekilli mikro kuyulara ekleyin.

Nöroküreleri, büyüme faktörleri ve küçük moleküller içeren bir farklılaşma ortamı içeren hücre dışı matris kaplı bir plakaya aktarın. Dopaminerjik progenitör nöronlara farklılaşmayı teşvik etmek için ajitasyon altında inkübe edin.

Ortamı nöral olgunlaşma ortamı ile değiştirin ve nöroküreleri, hava ve besinlerin difüzyonuna izin verecek şekilde bir kültür kuyusu ekinde bir zar diski üzerine yerleştirin.

Olgun dopaminerjik nöronlardan oluşan üç boyutlu organoidler oluşturmak için statik koşullar altında inkübe edin.

Gelişmekte olan bir beyni taklit eden bu organoidler, Parkinson hastalığının bir özelliği olan dopaminerjik nöron dejenerasyonunu incelem