Bir Sıçan Modelinde Aktif HIV Enfeksiyonu Oluşturulması

Anestezi uygulanmış bir sıçanla başlayın, traşlı kafasını dezenfekte edin ve stereotaksik bir cihaza sabitleyin.

Kafatasını ortaya çıkarmak için orta hat kesisi yapın.

Kafatası üzerinde iki pozisyon işaretleyin ve küçük delikler açın.

Stereotaksik aparata bir lentiviral vektör içinde ekotropik HIV RNA içeren kimerik virüsler içeren bir şırınga takın.

İğneyi, beynin bağışıklık hücreleri olan mikroglia da dahil olmak üzere beyin korteks hücrelerini hedef alan deliğe sokun.

Virüsleri kortekste eşit dağılımları için yavaşça enjekte edin.

Enjeksiyondan sonra, insizyonu dikin, bölgeyi dezenfekte edin ve farenin iyileşmesine izin verin.

Enjekte edilen virüs, beyin hücresi reseptörleri ile etkileşime girer, birleşir ve HIV RNA'sını sitoplazmaya bırakır.

RNA, DNA'ya ters kopyalanır ve hücrenin DNA'sına entegre olur.

Enfekte hücre, yeni RNA ve proteinler üreterek viral bileşenleri eksprese eder.

Bunlar, beyindeki viral yükü artıran ve aktif bir HIV enfeksiyonu oluşturan yeni virüsler olarak toplanır ve salınır.

EcoHIV EGFP enjeksiyonu için, pedal refleksine yanıt verilmediğini doğruladıktan sonra, beyin bölgesindeki kılları tıraş edin ve maruz kalan cildi% 70 etanol ve klorheksidin bazlı bir ovma ile 2 kez sterilize edin. Fareyi stereotaksik bir aparatta yüzüstü pozisyonda sabitleyin ve kafa derisi orta hattı boyunca deriden 5 ila 6 santimetrelik bir kesi yapın.

Bregma'ya 0,8 milimetre yanal ve 1,2 milimetre rostral bir delme pozisyonu işaretleyin ve her kafatası pozisyonunda 0,4 milimetre çapında bir delik açın. 10 mikrolitrelik bir enjeksiyon şırıngasına mililitre titreli EcoHIV Lentivirus çözeltisi başına 1.04 kez 10 ila altıncı transdüksiyon birimi yükleyin ve şırıngayı stereotaksik cihaza sabitleyin.

İğneyi bir delme deliğinin yüzeyine yaklaştırın ve iğneyi deliğe 2,5 milimetre sokun. Dakikada 0.2 mikrolitre virüs oranında 1 mikrolitre virüs çözeltisi infüze edin. Virüsün tamamı enjekte edildiğinde, iğneyi sıçan kafatasının dışına çıkana kadar yavaşça geri çekmeden önce iğneyi enjeksiyon alanının içinde beş dakika bırakın.

Cilt kesisini 4-0 ipek iplik dikişle kapatın ve solüsyonu %70 etanol ile sterilize edin. Ardından, fareyi, yaslanana kadar izlemeli bir ısıtma yastığı ile bir kurtarma odasına yerleştirin.