JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:29 dk. • July 8th, 2025
Bir embriyo ortamında döllenmiş zebra balığı embriyoları içeren bir kültür kabı ile başlayın.
Çanağı stereo mikroskop altına yerleştirin ve embriyoları çevreleyen dış zar olan koryonu çıkarmak için diseksiyon forseps kullanın.
Bu, embriyoların çevredeki ortama maruz kalmasını sağlar.
Bu dekoryonlanmış embriyoları, beynin kan damarı bütünlüğünü korumak için çok önemli olan kolesterol sentezini engelleyen bir ilaçla embriyo ortamı içeren bir tabağa aktarın.
Embriyolar larva haline gelene kadar kontrollü bir sıcaklıkta kuluçkaya yatırın.
Zamanla, ilaç gelişmekte olan larvalara nüfuz ederek kolesterol sentezini inhibe eder.
Kolesterol eksikliği beynin kan damarlarını zayıflatır, yırtılmalarına ve beyne kan sızdırmalarına neden olarak hemorajik lekeler geliştirir.
Larvaları stereo mikroskop altında gözlemleyin.
Farklı kırmızı lekelere sahip hemorajik larvaları hemorajik olmayan bir popülasyondan ayırın.
Bu hemorajik larvaları daha ileri çalışmalar için yeni bir tabağa aktarın.
Döllenmeden 24 saat sonra, parlak alanlı bir stereomikroskop altında, atorvastatin tedavisi için embriyoları de-koryonat yapmak için keskin ultra ince diseksiyon forsepsleri kullanın. Daha sonra, biri tedavi için diğeri kontrol için olmak üzere iki temiz Petri kabına 30 mililitre E3 embriyo ortamı ekleyin. Tedavi kabından 60 mikrolitre embriyo suyunu çıkarın ve kanamalı larvaların% 80'ini elde etmek için 60 mikrolitre 0.5 milimolar atorvastatin ekleyin.
Bir Pasteur pipeti kullanarak, 100 embriyoyu her tabağa mümkün olduğunca az su içinde aktarın. İki yemeği 28 santigrat derecede inkübe edin. Döllenmeden 50 saat sonra herhangi bir zamanda, mikroskop altında, kanamalı balıkları kanamasız popülasyonlardan dikkatlice ayırmak ve larvaları taze E3 ortamı içeren yeni yemeklere aktarmak için bir Pasteur pipeti kullanın.
Kanama pozitif larvaları ayırmayı kolaylaştırmak için, pigment içermeyen balıkları veya kırmızı kan hücrelerinde floresan proteini ifade eden balıkları kullanabilirsiniz.