JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:27 dk. • July 8th, 2025
Bir sialik asit raportörü tarafından etiketlenen sialoglikoproteinlere sahip birincil nöral kök ve progenitör hücreleri ve nöronları alın.
Hücreleri sabitlemek için paraformaldehit ekleyin. Tampon kullanarak fazla paraformaldehiti çıkarın.
Biyotin bazlı kimyasal problar, bir indirgeyici ajan ve metal bazlı bir katalizör içeren bir reaksiyon karışımı ile inkübe edin.
İndirgeyici ajan, sialoglikoproteinlerin biyotinilasyonunu kolaylaştırarak katalizörü aktive eder.
Reaksiyon karışımını çıkarın ve tampon ile yıkayın. Biyotinile sialoglikoproteinleri bağlamak için florofor konjuge streptavidin ekleyin.
Bağlanmamış streptavidini çıkarın ve tampon ile yıkayın. Spesifik olmayan bölgeleri bloke etmek ve hücrelere nüfuz etmek için proteinler ve iyonik olmayan bir deterjan ekleyin.
Bu çözeltiyi çıkarın ve spesifik hücresel proteinleri hedef alan birincil antikorlarla inkübe edin.
Bağlanmamış antikorları çıkarın.
Proteine bağlı birincil antikorları bağlamak ve çekirdekleri etiketlemek için florofor etiketli ikincil antikorlar ve bir floresan boya ile inkübe edin.
Bağlanmamış molekülleri çıkarın. Tampon ile yıkayınız.
Floresan mikroskobu kullanarak, floresan sialoglikoproteinleri ve hücresel p
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin