JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 4:53 dk. • July 8th, 2025
Floresan etiketli sinaptophysin ve sinaptotagmin-1 dahil olmak üzere sinaptik vezikül zarı proteinlerini eksprese eden kültürlenmiş nöronları içeren bir lamel ile başlayın.
Ortamı çıkarın, depolarizasyon tamponu ve birincil antikorların bir karışımını ekleyin, ardından inkübe edin.
Tampon iyonları hücrelere girer ve sinaptik veziküllerin zar ile füzyonunu uyarır ve bu da sinaptotagmin-1'i açığa çıkarır.
Birincil antikorlar, maruz kalan sinaptotagmin-1'e seçici olarak bağlanır.
Tamponu atın ve bağlanmamış antikorları çıkarmak için ortamla yıkayın.
Membran içselleştirmesini kolaylaştırmak için taze ortam ekleyin ve inkübe edin, etiketli sinaptofizin ve antikora bağlı sinaptotagmin-1 ile geri dönüştürülmüş veziküller oluşturun.
Ortamı çıkarın, hücreleri sabitleyin ve yıkayın.
Floroforla bağlanmış ikincil antikorlara sahip deterjan bazlı bir bloke edici tampon ekleyin.
Deterjan hücrelere nüfuz ederek ikincil antikorların antikora bağlı sinaptotagmin-1 ile etkileşime girmesine izin verir.
Lameli kaldırın, suyla yıkayın ve kurulayın.
Lameli yüzü aşağı bakacak şekilde, çift etiketli geri dönüştürülmüş veziküllerin optik analizi için gömme ortamı olan bir slayt üzerine yerleştirin.
600 mik
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin