JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:25 dk. • July 8th, 2025
Yanlış katlanmış bir proteinin kümeleri olan alfa-sinüklein veya alfa-S agregatları ile muamele edilmiş yapışık bir nöron kültürü ile başlayın.
Bu kümeler, hücre içi inklüzyonlar oluşturmak üzere toplanır.
Hücresel bütünlüğü korumak için ortamı bir sabitleme solüsyonu ile değiştirin.
Sabitleme solüsyonunu çıkarın ve tamponla yıkayın.
Ardından, hücresel zarı geçirgen hale getirmek için bir yüzey aktif madde ekleyin.
Yüzey aktif maddeyi çıkarın ve tampon ile yıkayın.
Spesifik olmayan antikor bağlanmasını önlemek için bir bloke edici çözelti tanıtın.
Şimdi, spesifik olarak alfa-S inklüzyonlara ve yapısal proteinlere bağlanan birincil antikorlarla inkübe edin.
Bağlanmamış antikorları çıkarmak için tamponla yıkayın.
Floresan etiketli ikincil antikorlarla inkübe edin.
Bağlanmamış antikorları çıkarın.
Çekirdeği etiketlemek için bir floresan lekesi ekleyin.
Lekeyi çıkarın ve tampon ile yıkayın.
Montaj ortamını kullanarak, lameli nöronlarla birlikte bir kızağa monte edin.
Floresan mikroskobu altında, nöron içindeki immün etiketli alfa-S inklüzyonları gözlemleyin.
Kimyasal bir davlumbazda immünofloresan yapmak için, nöronları PBS'de %2 paraformaldehit ve %5 sükroz çözeltisi ile oda sıcaklığı
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin