JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:56 dk. • July 8th, 2025
Anestezi uygulanmış yetişkin bir zebra balığı ile başlayın.
Balıkları bir silikon pim tutucuya aktarın ve gözü yağlamak için bir sentetik polimer tabakası uygulayın.
Ardından, lazeri hedefleyen bir ışını retinaya odaklamak için gözün önüne bir lazer lensi yerleştirin.
Lazeri zebra balığının gözüne yönlendirerek retinanın yaralanmasına neden olur.
Lazer, termal hasara ve retinal fotoreseptör hücrelerinin ölümüne neden olarak, günler içinde ilerleyen ve retina pigmentli epitelden dış pleksiform tabakaya uzanan dejeneratif bir süreç başlatır.
Buna karşılık, Muller glia (MG) hücreleri reaktif gliozise uğrar, hipertrofik ve proliferatif hale gelir.
Bu hücreler daha sonra kök hücre progenitörlerine farklılaşır.
Progenitör hücreler yavaş yavaş yaralanma bölgesine göç eder ve mikro çevreden gelen uzamsal ve zamansal ipuçlarının rehberliğinde, birkaç gün içinde olgun retina hücre tiplerine farklılaşır, böylece retina yapısının yenilenmesini kolaylaştırır.
400 miligram trikain tozunu 97.9 mililitre tank suyunda ve 2.1 mililitre bir molar TBS'de çözerek bir stok anestezik çözeltisi hazırlayın. pH 9'da bir molar tris ile pH 7.0'a ayarlayın. Çalışma çözeltisini yapmak için, tricaine stok çözeltisini 1 ila 25 tank suyunda seyreltin ve 50 mililitreyi bir Petri kabına aktarın. Daha sonra zebra balığını, hareketsiz hale gelene ve dış uyaranlara cevap vermeyene kadar 2 ila 5 dakika anestezik solüsyona yerleştirin.
Lazer tedavisi için her balığı elle özel yapım bir silikon pim tutucuya aktarın.
Uygun anestezi, hayvanın sağlığı ve işlemin başarısı için kritik öneme sahiptir. Bu nedenle, taze hazırlanmış trikin çözeltisi çok önemlidir ve sudan çıkma süresi 10 dakikayı geçmemelidir.
532 nanometre diyot lazerin çıkış gücünü 70 miliwatt'a, darbe süresini 100 milisaniyeye ve hava çapını 50 mikrona ayarlayın. Ardından göze 1 ila 2 damla %2 hidroksipropil metilselüloz uygulayın.
Metil hücreyi göze uygularken, viskoz solüsyonun solungaçlara gitmediğinden emin olun.
Ardından, lazer hedefleme ışınını retinaya odaklamak için 2 milimetrelik bir fundus lazer lensi kullanın. Sol gözdeki optik sinirin etrafına dört lazer noktası yerleştirin ve tedavi edilmemiş sağ gözü iç kontrol olarak kullanın.