JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 2:47 dk • July 8th, 2025
Bir cam enjeksiyon kılcal damarını, agregasyona eğilimli özelliklere sahip anormal peptitler olan sentetik monomerik amiloid peptitlerin bir çözeltisi ile doldurun.
Kılcal damarı bir mikroenjeksiyon tutucusuna yerleştirin.
Aynı anda bir zebra balığını anestezik bir çözelti içeren bir petri kabına yerleştirin.
Balık uyuşturulduktan sonra, kafayı sabitlemek için forseps ile yanlamasına tutun.
Nöron açısından zengin ön beyne erişmek için iki yan plakanın birleştiği yerde balık kafatasında küçük bir kesi yapın.
Şimdi, kılcal iğneyi kesiden geçirin ve amiloid peptit solüsyonunu ön beyne enjekte edin.
Zebra balığını dolaşan su ile bir kurtarma kabına aktarın.
Ön beynin içinde, amiloid peptitler nöronların yakınında birikir.
Bu peptitler, beta tabakaları oluşturmak için kendiliğinden yanlış katlanır ve toksik amiloid plaklar oluşturmak için nöronların etrafında toplanır.
Bu plaklar nöronlara zarar verir ve sinyal iletimini bozar.
Bu, amiloid plaklarla karakterize bir beyin bozukluğu olan Alzheimer hastalığının bir zebra balığı modelini oluşturur.
Cam enjeksiyon kılcal damarlarını hazırlamak için metin protokolünde belirtilen parametrelere sahip bir iğne çektirmesi kullanın. Basınç kaynağındaki basınç ayarını 25 PSI olarak ayarlayın. Ardından, mikro enjektörde tutma basıncını 20 PSI'ye, çıkarma basıncını 10 PSI'ye, periyot değerini 2.5'e ve geçit değerini 100 milisaniyeye ayarlayın. Ardından, cam kılcal damarı enjeksiyon çözeltisi ile yükleyin.
Ardından, cam kılcal damarı mikro enjeksiyon tutucusuna yerleştirin ve enjeksiyon açısını 45 dereceye ayarlayın. Bir balığı anestezi solüsyonu ile doldurulmuş yeni bir Petri kabına koyun. Anestezi uygulandıktan sonra, balığı forseps ile tutun ve enjeksiyon için yönlendirin. 30 gauge bir iğnenin ucunu kullanarak, iki yan plakanın birleştiği optik tektum üzerinde kafatasında bir yarık oluşturun. İğnenin sadece ucunu kullanın ve kafatasından 1 milimetreden fazla nüfuz etmeyin.
Daha sonra, balığı tutmaya devam ederken, cam kılcal damarın ucunu kesi bölgesinden geçirin. Cam kılcal damarın ucunu 45 derecelik bir açıyla telensefalona doğru yönlendirin, ardından 1 mikrolitre çözelti enjekte edin. Balıkları iyileşene kadar bir taşıma kabına geri koyun. Ardından, optimum su kalitesini sağlamak için kaba düzenli olarak dolaşan balık suyuna bağlayın.