Drosophila Sineklerinde Kapalı Kafa Travmatik Beyin Hasarı Uygulamak İçin Bir Teknik

Kontrolü ele alın ve yetişkin Drosophila'nın anestezi altında uçtuğunu test edin.

Test sineğini bir tutucuya yerleştirin ve sineğin kafasını ucun dışına yerleştirmek için hafifçe vurun. Hedef dışı yaralanmaları önlemek için sineğin ağız kısımlarının ve vücudunun tutucunun içinde kaldığından emin olun.

Tutucuyu, sineğin başı aşağı bakacak şekilde bir çarpma cihazına takın.

Cihaz, kontrollü bir gaz kaynağına bağlıdır ve yaralanmaya neden olmak için gazla çalışan bir çarpma tertibatı içerir.

Çarpma tertibatını itmek ve sineğin kafasına çarpmak için bir gaz patlaması yapın, bu da dış hasar olmadan kapalı kafa travmatik beyin hasarına neden olur.

Ortaya çıkan mekanik stres nöronlara zarar vererek işlevlerini bozar.

Sineği serbest bırakmak için tutucuyu çıkarın, ardından kurtarma için bir şişeye aktarın.

Kontrol sineği için, çarpma tertibatı ile çarpmadan bir gaz patlaması uygulayın.

Kontrol ve test sinekleri artık yaralanmanın etkisini değerlendirmeye hazırdır.

Karbondioksit kullanarak iki günlük tek bir yetişkin dişi sineği uyuşturun.

Karbondioksit pedinden ince bir fırça kullanarak sineği nazikçe tutucuya aktarın.

Ardından, kafa uçtan dışarı çıkana kadar tutucuya hafifçe vurun.

Hortum açığa çıkarsa, nazikçe ucun içine geri sokmak için körelmiş 1 mililitrelik bir şırınga iğnesi kullanın. Sinek gövdesini, özellikle ağız kısmını, tutucunun içinde tutmak çok önemlidir. Aksi takdirde, sinek iç organlara zarar vermekten veya yiyecek yiyememekten ölebilir.

Ardından, gaz basıncını 100 kilopaskal'a ayarlayın ve akışı gerektiği gibi ayarlayın. Sinek yüklendikten sonra, sinek kafası aşağı bakacak şekilde konektörü kullanarak tutucuyu şırınga namlusuna sıkın.

Ardından, geçiş anahtarını kullanarak, çarpma tertibatını sineğe yalnızca bir kez çarpacak şekilde hareket ettiren bir gaz patlaması gönderin.

Şimdi, sinek tutucuyu ayırın ve sineği karbondioksit pedine geri boşaltın.

İyileşene kadar sineği boş bir şişeye fırçalayın.

Flakon başına bir sinek bulundurun. Kurtarma işlemi sadece birkaç dakika sürer.

Deney grubu başına dört sineği test etmek için işlemi tekrarlayın. Bir test ve bir sahte olmak üzere iki grubun işlenmesi sadece 20 ila 30 dakika sürmelidir. Çarpma tertibatı tüpüne bir aerosol bariyeri dahil etmemek dışında, şemşeklere tıpkı test hayvanları gibi davranın.