Hücre dışı alanı incelemenin önemi nedir?

Hücre dışı alan, beyin hücrelerinin nasıl iletişim kurduğunu ve işlediğini anlamak için kritik öneme sahiptir.

Iyon-seçici mikroelektrotlar nasıl çalışır?

Çözeltideki spesifik iyonları ölçerler ve iyon konsantrasyonlarının ayrıntılı analizini sağlarlar.

Tetrametilamonyum (TMA) nedir?

TMA, iyon difüzyon çalışmalarında bir izleyici olarak kullanılan kuaterner amonyum bileşiğidir.

Bu yöntemin ana uygulamaları nelerdir?

Beyin fizyolojisi, ilaç etkileri ve nörodejeneratif durumları incelemek için kullanılabilir.

Bu yöntem diğer doku türlerine uygulanabilir mi?

Evet, benzer teknikler diğer biyolojik dokular için uyarlanabilir.

Bu çalışmanın sınırlamaları nelerdir?

Yöntem, beyin dilimi hazırlamasının özel koşulları ve iyon ölçümlerinin doğruluğu ile sınırlı olabilir.

İyon Seçici ve İyontoforez Mikroelektrotları Kullanılarak Bir Beyin Dilimindeki Hücre Dışı Boşluğun Karakterize Edilmesi

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuroscience

0 views • 3:01 min • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yapay beyin omurilik sıvısına veya aCSF'ye batırılmış güvenli kalın bir beyin dilimi içeren bir kayıt odası ile başlayın.

Bu beyin dilimi, beyin hücrelerini çevreleyen birbirine bağlı hücre dışı boşluğu oluşturan interstisyel sıvı ve hücre dışı matrisi içerir.

Çift kanallı iyon seçici mikroelektrodu ve iyontoforez mikroelektrodunu aCSF'ye daldırın.

Çift kanallı iyon seçici mikroelektrot, tetrametilamonyum veya TMA iyonları için bir algılama kanalına ve bir referans kanalına sahipken, iyontoforez mikroelektrodu bir TMA çözeltisi içerir.

İyontoforez elektrodu, iyon seçici mikroelektrota doğru yayılan TMA iyonlarını serbest bırakır.

Algılama kanalı bu TMA iyonlarını algılar ve bir elektrik sinyali üretir. Bunu temel olarak kaydedin.

Her iki elektrotu da hafifçe ayrı tutarak beyin dilimine yerleştirin.

TMA iyonları hücre dışı boşluktan yayılırken, iyon seçici mikroelektrota ulaşırlar.

Sinyali yeniden kaydedin ve hacim fraksiyonu ve bükülme derecesi gibi hücre dışı boşluk özelliklerini analiz etmek için taban çizgisiyle karşılaştırın.

Kayıt odasına 400 mikrometre kalınlığında bir beyin dilimi yerleştirin ve akan ACSF'ye tamamen daldırıldığından emin olun. Ardından, hem iyontoforez mikroelektrodunu hem de ISM'yi beyin dilimindeki ilgi alanının üzerine taşıyın. Her iki elektrotu da akan ACSF'ye, ancak dilimin üzerine daldırın. Ardından, hem referans hem de iyon algılama kanallarının voltajını 0 milivolta ayarlayın. Her iki kanaldaki voltajın stabilize olmasını bekleyin.

Grafik kaydedicide, ISM'nin iyon algılama kanalında ölçülen voltajı işaretleyin. Ardından, ISM ve iyontoforez mikroelektrotlarını dilimin 200 mikrometre derinliğine ve birbirinden 120 mikrometre uzağa yerleştirin. Akan ACSF'de ve beyinde ölçülen TMA sinyalleri arasındaki voltaj farkını hesaplayın ve bu değeri Wanda GUI'nin ölçüm elektrot kutusundaki temel volt milivolt alanına girin.

GUI'nin sol tarafında, tüm deneysel parametrelerin doğru girildiğinden emin olun. Edin'e tıklayarak kaydı başlatın ve tam bir kayıt almasına izin verin. Her iki mikroelektrotu da dilimden çıkardıktan sonra, şu anda ölçülen voltaj ile daha önceki ölçümü arasındaki herhangi bir değişikliği belirlemek için grafik kaydediciyi kullanın.