Bir Alzheimer Hastalığı Modeli için Amiloid-Beta Proteinlerinin Doğrudan Stereotaksik Beyin İnfüzyonu

Açıkta kalan bir kafatası ile anestezi uygulanmış bir fare ile başlayın. Fare, agregasyona eğilimli amiloid-beta proteinleri ile önceden doldurulmuş bir şırınga içeren stereotaksik bir çerçeve içine sabitlenir.

Protein infüzyon koordinatlarını belirlemek için önemli bir referans noktası olan bregma'yı işaretleyin.

Şırıngayı hareket ettirin ve dorsal-ventral koordinatları belirlemek için bregmaya, ardından lambdaya dokunun ve hassas iğne derinliği sağlayın.

Şırıngayı, hafıza işleme için çok önemli olan dentat girusu hedefleyerek önceden belirlenmiş medial-lateral koordinatın üzerine yeniden konumlandırın.

Kafatası yüzeyine dokunun, dorsal-ventral koordinatın sınır içinde olduğundan emin olun ve işaretleyin. Bu işlemi karşı tarafta tekrarlayın.

İşaretli medial-lateral koordinatta delin, amiloid-beta proteinlerini dentat girusa enjekte edin ve geri akışı önlemek için tutun.

Düzgün protein dağılımı için karşı tarafa amiloid-beta proteinlerini delin ve enjekte edin.

Kulak çubuklarını fareden çıkarın, ardından kesiği dikin.

Zamanla, amiloid-beta proteinleri, dentat girus nöronlarını bozan ve hafıza işlemeyi bozan plaklar oluşturmak üzere toplanır ve bu da Alzheimer hastalığına neden olur.

Bir neşter ile kafa derisinin orta hattında 2 ila 3 milimetrelik bir kesi yapın. Kafatasının sagital sütürünü, bregmasını ve lambdasını ortaya çıkarmak için kesi hattını yaklaşık 1.0 santimetreye uzatmak için düz ince makas kullanın. Bundan sonra, cildi ayırmak için forseps kullanın.

Kafatasını steril tuzlu su ile ıslatılmış steril bir pamuklu çubukla temizleyin. Ardından kafatasını kurutmak için temiz, kuru bir pamuklu çubuk kullanın. Sonra, bregma üzerinde bir nokta işaretleyin. Mikromanipülatörü kullanarak Hamilton şırıngasını, iğnenin ucu bregma üzerindeki noktaya değecek şekilde konumlandırın. Ardından, DV koordinatını kaydedin.

Lambda noktasında bir nokta işaretleyin. Şırıngayı lambda noktasına arkaya doğru hareket ettirerek kafatasının AP ekseninin düz olduğundan emin olun. İğnenin ucu, bregma noktasında olduğu gibi lambda noktasına da temas etmelidir. Bundan sonra, DV konumunu kaydedin. Bregma ve lambda için DV koordinatları 0,5 milimetre içinde olmalıdır.

Şimdi, iğne ucunu bregma noktasına geri getirin. Başlangıç AP konumunu kaydedin. Ardından, başlangıç AP koordinatından 2 milimetre çıkararak bitiş AP konumunu hesaplayın ve şırınga iğnesini son AP koordinatına göre yeniden konumlandırın.

Ardından, geçerli ML koordinatını kaydedin. Başlangıç ML koordinatına 1,3 milimetre ekleyerek veya çıkararak sol ve sağ bitiş ML koordinatlarını hesaplayın ve şırınga iğnesini bitiş ML koordinatlarına hareket ettirin. İğne ucunu her iki uç ML koordinatında kafatasının yüzeyine dokundurun ve DV koordinatlarının 0,5 milimetre içinde olduğundan emin olun.

Bitiş ML koordinatındayken, iğneyi kafatasının 0,5 ila 1 santimetre üzerine çekin. Koyu renkli ekstra ince noktalı bir işaretleyici ile kafatası üzerinde bir nokta işaretleyin. Kafatasının karşı tarafı için bu adımı tekrarlayın. Ardından, şırıngayı uzaklaştırın.

0,8 milimetrelik bir matkap ucu kullanarak kafatasının sol veya sağ ML koordinatında bir delik açın. Karşı taraf için bu adımı tekrarlayın. Daha sonra, şırıngayı yeni açılan deliklerden birine taşıyın. İğneyi kafatasının hemen yanından geçecek şekilde indirin ve beyni delmemeye dikkat edin.

İğnenin kafatasını geçtiğinden emin olmak için, iğnenin delikten çıkmadığından emin olmak için iğneyi hafifçe kafatasına doğru itin. Ardından, başlangıç DV koordinatını kaydedin. Başlangıç DV koordinatından 2,2 milimetre çıkararak bitiş DV koordinatını hesaplayın ve iğneyi bitiş DV koordinatına indirin.

Ardından, stereotaksik enjektör pompasını dakikada 0,5 mikrolitre hızında dentat girusa 4 mikrolitre Aβ_1-42 infüze edecek şekilde ayarlayın. İnfüzyondan sonra, çözeltinin enjeksiyon bölgesinden geri akışını en aza indirmek için iğnenin bir dakika daha yerinde kalmasına izin verin. Bundan sonra, iğneyi beynin diğer tarafına hareket ettirin ve işlemi tekrarlayın.

Şimdi kulak çubuklarını sökün. Kafa derisini kapatmak ve yarayı bir dikişle kapatmak için öğrenci standart desen forsepslerini kullanın. Burun koruyucusunu çıkarın ve fareyi çıkarın.