JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 2:27 dk • July 8th, 2025
Anestezi uygulanmış bir fareye bir nöronal peptit ve ısıyla öldürülmüş bir bakteri adjuvanı içeren bir emülsiyonu deri altına enjekte ederek başlayın.
Subkütan dokuda, adjuvan, nöronal peptitleri majör histokompatibilite kompleksleri üzerinde işleyen ve sunan antijen sunan hücreleri veya APC'leri çeker.
Aktive edilmiş APC'ler lenf düğümlerine ulaşır ve naif T hücreleri ile etkileşime girerek otoreaktif T hücrelerine farklılaşmalarını sağlar.
Bu T hücreleri dolaşır ve kan-beyin bariyerine veya BBB'ye ulaşır.
Daha sonra, intraperitoneal olarak bakteri türevli ekzotoksinleri enjekte edin.
Ekzotoksinler BBB'ye ulaşır, geçirgenliğini arttırır ve T hücresinin merkezi sinir sistemine (CNS) sızmasına izin verir.
CNS'de, T hücreleri, nöronal peptidi sunan yerleşik APC'lerle etkileşime girer ve daha fazla bağışıklık hücresi infiltrasyonunu indükleyen sitokin salınımını teşvik eder.
Bağışıklık hücreleri proinflamatuar sitokinler salgılayarak miyelin hasarına neden olur.
Ek olarak, B hücreleri T hücreleri ile etkileşime girer ve miyeline daha fazla zarar veren otoantikorlar salgılayarak deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE) oluşturur.
Bu prosedürde, PTX'i 1x PBS'de mililitre başına 2 mikrogramda çözün ve iyice karıştırın. Daha sonra, kısa izofluran anestezisi sırasında farelere deri altı, kuyruğun tabanında iki kez 100 mikrolitre PLP / CFA enjekte edin. Boynun arkasına enjekte etmeyin, çünkü üst sırt veya boyundaki derideki herhangi bir bağışıklık reaksiyonu başın ve omuriliğin görüntülenmesini bozacaktır.
Bağışıklamadan bir ila iki saat sonra, farelere intraperitoneal olarak 100 mikrolitre PTX enjekte edin.
Daha sonra, aşılamadan 24 saat sonra, farelere tekrar 100 mikrolitre PTX enjekte edin. Kontrol fareleri için, kuyruğun tabanına iki kez PLP'siz 100 mikrolitre CFA enjekte edin.