Embriyonik Murin Gastrointestinal Sistemindeki Nöronal Popülasyonların İmmünofloresan Boyanması

0 görüntüleme2:58 dk • July 8th, 2025

İstenilen gelişim aşamasında sabit, transgenik bir embriyonik fare gastrointestinal sistemi alın.

Gastrointestinal sistemin enterik sinir sistemi, kolin asetiltransferaz eksprese eden enterik nöronları ve kolinerjik nöronları içerir.

Bu kolinerjik nöronlar ayrıca kolin asetiltransferaz promotörü tarafından yönlendirilen bir floresan proteini eksprese eder.

Hücrelere nüfuz etmek ve spesifik olmayan antikor bağlanmasını önlemek için yolu iyonik olmayan bir deterjan ve proteinlerle inkübe edin.

Birincil antikorlarla değiştirin. Antikorların sırasıyla nöronlardaki hedef proteinlerini bağlaması için inkübe edin.

Bağlanmamış antikorları çıkarın ve tampon ile yıkayın.

Hedef proteinlere bağlı birincil antikorları spesifik olarak bağlamak için florofor konjuge ikincil antikorlarla inkübe edin.

Fazla antikorları çıkarın ve tampon ile yıkayın.

Etiketli kanalı, çekirdekleri lekelemek için nükleer bir boya içeren montaj ortamına daldırın. Şimdi, bir lamel monte edin.

Konfokal mikroskopi kullanarak, gastrointestinal sistemdeki kolinerjik nöronların dağılımını görselleştirin ve analiz edin.

GI kanallarını, 1x PBS,% 3 sığır serum albümini, 0.1 Triton X-100 ve oda sıcaklığında 1 saat boyunca kayadan oluşan bloke edici çözelti içeren 0.2 mililitrelik bir tüpe yerleştirin. Bloklamadan sonra, blokaj solüsyonunu ince uçlu bir Pasteur pipeti ile aspire edin ve blokaj solüsyonunda seyreltilmiş primer antikorların optimal seyreltilmesi ile değiştirin.

Oda

sıcaklığında dört saat veya sallanan platformda gece boyunca 4 santigrat derecede inkübe edin. Birincil antikor inkübasyonunu takiben, antikor çözeltisini aspire edin ve GI yollarını PBS'de her biri beş dakika boyunca üç kez ve daha sonra oda sıcaklığında bir saat boyunca sallayarak durulayın.

Son yıkamadan sonra, PBS'yi bloke edici çözelti içinde seyreltilmiş florofor konjuge ikincil antikorlarla değiştirin ve tüpleri karanlıkta dört saat boyunca oda sıcaklığında veya gece boyunca 4 santigrat derecede sallanan platforma yerleştirin.

GI kanallarını daha önce olduğu gibi yıkadıktan sonra, DAPI ile birkaç damla floresan montaj ortamını bir cam slayt üzerine yerleştirin, ardından GI kanalını montaj ortamına daldırın ve bir kapak camı ekleyin. Son olarak, konfokal bir mikroskop kullanarak her bir floroforun görüntülerini yakalayın, ardından uygun yazılımı kullanarak bilgisayar destekli görüntü analizi yapın.

09:44

Bezelye Afit Embriyolar immün için kritik Koşulların Belirlenmesi: Doku geçirgenliğini arttırarak ve Arka Plan Boyama azaltılması

İlgili videolar

0 Görüntüler

06:47

İlköğretim nöron değerlendirilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:01

CLARITY Doku Temizleme Yöntemi ile Tüm Mount Retinaların İmmünasyonunun İmmünasyon

İlgili videolar

0 Görüntüler

04:52

Bir farenin submukoza ve lamina propriasından enterik glial hücrelerin izole edilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:59

Fare Beyin Bölümlerinde Prolifere Nöral Kök Hücreleri Görselleştirmek için İmmünofloresan Boyama

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:04

Floresan In Situ Hibridizasyonun Ardından Fare Beyin Dilimlerinde Nöronların İmmün Boyanması

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:26

Kemirgen Enterik Sinir progenitörlerin için Kantitatif Hücre Göç Tahlili

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:10

Geç evre embriyonik ve larva soniklenmesi-kolaylaştırdı Immunoflorasan Boyama

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:54

Fare Enterik Sinir Sistemi Geliştirme gözünüzde canlandırın için immün

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:42

Immünohistokimyasal ve immünofloresan Analizleri için Bağırsak Doku Hazırlama için geliştirilmiş Swiss-haddeleme Tekniği

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 29 Ağustos 2026