Embriyonik Murin Gastrointestinal Sistemindeki Nöronal Popülasyonların İmmünofloresan Boyanması
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:58 dk. • July 8th, 2025
İstenilen gelişim aşamasında sabit, transgenik bir embriyonik fare gastrointestinal sistemi alın.
Gastrointestinal sistemin enterik sinir sistemi, kolin asetiltransferaz eksprese eden enterik nöronları ve kolinerjik nöronları içerir.
Bu kolinerjik nöronlar ayrıca kolin asetiltransferaz promotörü tarafından yönlendirilen bir floresan proteini eksprese eder.
Hücrelere nüfuz etmek ve spesifik olmayan antikor bağlanmasını önlemek için yolu iyonik olmayan bir deterjan ve proteinlerle inkübe edin.
Birincil antikorlarla değiştirin. Antikorların sırasıyla nöronlardaki hedef proteinlerini bağlaması için inkübe edin.
Bağlanmamış antikorları çıkarın ve tampon ile yıkayın.
Hedef proteinlere bağlı birincil antikorları spesifik olarak bağlamak için florofor konjuge ikincil antikorlarla inkübe edin.
Fazla antikorları çıkarın ve tampon ile yıkayın.
Etiketli kanalı, çekirdekleri lekelemek için nükleer bir boya içeren montaj ortamına daldırın. Şimdi, bir lamel monte edin.
Konfokal mikroskopi kullanarak, gastrointestinal sistemdeki kolinerjik nöronların dağılımını görselleştirin ve analiz edin.
GI kanallarını, 1x PBS,% 3 sığır serum albümini, 0.1 Triton X-100 ve oda sıcaklığında 1 saat boyunca kayada
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin