Alfa-sinüklein Fibrillerinin Enjeksiyonu ile Farelerde Nöroinflamasyonun İndüksiyonu

Transgenik bir fareyi sırt pozisyonunda konumlandırın. Fare, agregasyona eğilimli olan alfa-sinüklein proteininin mutasyona uğramış bir formunu ifade eder.

Yanlış katlanmış alfa-sinüklein proteininin agregatları olan alfa-sinüklein fibrillerinin bir süspansiyonunu alın.

Sistemik dağılımlarına izin vermek için fibrilleri periton boşluğuna enjekte edin.

Kan dolaşımına girdikten sonra, fibriller merkezi sinir sistemine ulaşır ve kan-beyin bariyerinin endotel hücrelerine bağlanır.

Fibriller, hücreler boyunca veziküller yoluyla taşınır ve sinir dokusuna girer. Daha sonra endositoz yoluyla nöronları istila ederler ve mutasyona uğramış alfa-sinüklein proteinlerinin toplanmasını teşvik ederler.

Bu agregalar ekzositoz ile salınır ve komşu nöronlara, mikroglialara ve astrositlere yayılır.

Agregaların tanınması, dokuya zarar veren reaktif oksijen türlerini ve ek bağışıklık hücrelerini işe alan sitokinleri serbest bırakmak için mikroglia'yı tetikler. Bu, nöral hücre ölümüne yol açan nöroinflamasyon ile sonuçlanır.

Alfa-sinüklein aracılı nöroinflamasyonu değerlendirmek için farenin iyileşmesine izin verin.

İntraperitoneal enjeksiyonlar için, hayvanları izofluran içeren bir anestezi odasında kısaca narkotize edin. Yine, hayvanın ayak parmağını sıkıştırın ve uygun anesteziyi sağlamak için arka ayağını çekmediğini onaylayın. 27 gauge tek kullanımlık bir hipodermik şırıngayı 50 mikrolitre sonikasyonlu alfa-sinüklein fibrilleri veya PBS ile doldurun.

Hayvanı, başı araştırmacıdan uzağa bakacak ve yaklaşık 45 derece aşağı bakacak şekilde sırt pozisyonunda tutun. Karın duvarının arkasında bulunan ince bağırsağa veya çekuma nüfuz etmeden doğrudan farenin peritonuna enjekte edin. Anesteziden kurtulana kadar hayvanları izleyin.