JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 5:36 dk. • July 8th, 2025
Doğrulanmış bir nörodejeneratif hastalık vakasından donmuş bir ölüm sonrası insan beyni dokusu örneği ile başlayın.
Çözünmeyen protein agregatları açısından zengin gri maddeyi tüketin, hastalığın ayırt edici özelliği.
Dokuyu bir homojenizatöre aktarın.
İnhibitörler içeren bir tampon ekleyin ve hücre içi bileşenleri serbest bırakmak için homojenize edin.
İnhibitörler proteaz ve fosfataz enzimlerini bloke ederek protein bozulmasını önler.
Homojenatı bir tüpe aktarın ve iyonik bir deterjan tamponu ekleyin. Kuluçkaya yatmak.
Deterjan, doğal olarak katlanmış proteinleri çözerken, yanlış katlanmış protein agregatları bozulmadan kalır.
Hücresel ayrışmayı tamamlamak için sonikat.
Homojenatı bir ultrasantrifüj tüpüne aktarın ve yüksek hızda santrifüjleyin.
Agregalar dibe çöker.
Deterjanda çözünür proteinler içeren süpernatanı çıkarın.
Agregaları iyonik bir deterjan tamponu, santrifüj ile yıkayın ve süpernatanı çıkarın.
Protein agregatlarını denatüre etmek ve onları çözünür hale getirmek için üre tamponu ekleyin.
Çözündürülmüş protein agregatlarını bir tüpe aktarın ve tam çözünmeyi sağlamak için kısaca sonikat yapın.
Sağlıklı kontrolden donmuş postmortem beyin dokusu elde edin ve patolojik o
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin