Deneysel Bir Otoimmün Nörit Fare Modelinde Motor Fonksiyonun Değerlendirilmesi

Koşu hareketini kaydetmek için bir koşu bandına bir fare yerleştirin ve vücut hareketlerini kontrol etme yeteneğini temsil eden motor işlevini değerlendirin.

Testten sonra, kan sinir bariyerini zayıflatmak için anestezi uygulanmış farenin karın boşluğuna Boğmaca toksini enjekte edin.

Daha sonra, farenin omuz bıçakları arasındaki kılları alın, alanı dezenfekte edin ve miyelin taklit eden peptitleri deri altı dokusuna bir adjuvan ile enjekte edin.

Optimal reaksiyonlar için her iki enjeksiyonu da tekrarlayın.

Peptitler, lenf düğümlerine göç eden ve otoreaktif T hücreleri üreten antijen sunan hücreleri uyarır.

Bu T hücreleri kan dolaşımına girer, bozulmuş kan-sinir bariyerini geçer ve periferik sinirleri hedef alarak sitokinlerin salınmasına yol açar.

Bu, miyelin kılıfını bozan efektör molekülleri serbest bırakan makrofajları ve B hücrelerini çeker.

Miyelinin parçalanması, sinir sinyali iletimini ve deneysel otoimmün nörit veya EAN'ın başlangıcını bozar.

Son olarak, koşu bandı testini tekrarlayın. Fare, motor işlev bozukluğunu gösteren uzuv hareketlerini koşturmada ve koordine etmede zorluk gösterir.

Hastalık indüksiyonundan üç gün önce, motor fonksiyon değerlendirme cihazını açın ve ışık düğmesini açın. Fareyi alın ve bir kırmızı gıda boyası kabının üzerine indirin. Fareyi yürüme bölmesine yerleştirin ve koşu bandı hızını saniyede 15 santimetreye ayarlayın. Koşu bandını açın ve farenin 36 saniye boyunca koşu hareketini yakalamak için yürüyüş işlevi görüntüleme sistemini kullanmak için "kaydet"e tıklayın.

36 saniye sonra kaydı ve koşu bandını durdurun ve alıştırma çalıştırması video dosyasını alıştırma koşusunun belirlenen klasöre kaydedin.

İlk bağışıklamadan bir gün önce, anestezi uygulanmış altı ila sekiz haftalık erkek C57 siyah 6 fareye 250 mikrolitre fare izotonik PBS IP'de mililitre boğmaca toksini başına 1.6 mikrogram boğmaca toksini uygulamak için 30_1/2 gauge iğne ile donatılmış 0.5 mililitrelik bir şırınga kullanın.

Ertesi gün, eşit hacimlerde taze hazırlanmış peptit çözeltilerini% 0.9 salin ve mililitre başına 20 miligram Mycobacterium tuberculosis içinde tam Freund'un adjuvanında bir boncuk çırpıcıda birleştirin ve çözeltileri oda sıcaklığında 1 dakika boyunca maksimum hızda karıştırın.

Aşı ile birlikte 23 gauge iğne ile donatılmış bir şırınga yükleyin ve şırınga mili içindeki herhangi bir havayı boşaltmadan önce şırıngayı ters çevirin ve sallayın.

İnkülumu vermeden önce, kürek kemiği arasındaki orta hattın hemen yanındaki tüyleri çıkarın ve maruz kalan cildi% 70 etanol ile dezenfekte edin.

Ardından, cildi kavramak için bir çift Addison forseps kullanın ve 50 mikrolitre solüsyonu boğmaca toksini enjekte edilen fareye deri altı enjeksiyon yoluyla verin.

Ertesi sabah, az önce gösterildiği gibi 250 mikrolitre PBS IP'de mililitre boğmaca toksini başına 1.2 mikrogram verin, ardından 48 saat sonra mililitre boğmaca toksini IP'si başına 1.2 mikrogram daha ekleyin.

Üç gün sonra, üçüncü boğmaca enjeksiyonundan sonra, daha önce olduğu gibi aynı enjeksiyon bölgesine 50 mikrolitre daha taze hazırlanmış inokülum uygulayın ve deneyin sonuna kadar hayvanların klinik skorunu ve motor fonksiyonunu haftada iki kez izleyin.