Reaktif Astrogliozu İndüklemek için Bir Fare Modelinde Kortikal Bıçak Yaralanması Oluşturma

Anestezi uygulanmış bir fareyi stereotaksik bir çerçeveye sabitleyin.

Başını tıraş edin ve bölgeyi dezenfekte edin. Kornea kurumasını önlemek için göz merhemi sürün.

Kafatasını ortaya çıkarmak için bir kesi yapın.

Üstteki zarları çıkarın ve yüzeyi tuzlu su ile temizleyin.

Kafatasında korteksi hedef alan bir bölgeyi işaretleyin.

İşaretli bölge boyunca delin. Doku hidrasyonunu korumak için tuzlu su uygulayın.

Gevşemiş kemik parçasını çıkarın ve alttaki korteksi açığa çıkarın.

Doku kurumasını önlemek ve kanı emmek için tuzlu suya batırılmış jel köpük yerleştirin.

Bir prob tutucuya bağlı steril bir bıçağı korteksin üzerine yerleştirin. Ardından jel köpüğü çıkarın.

Kortekse nüfuz etmek için bıçağı indirin ve mekanik bir yaralanma oluşturmak için tekrarlanan vuruşlarla yatay olarak hareket ettirin.

Bıçağı çıkarın ve kanı emmek için jel köpük kullanın. Cerrahi insizyonu dikin.

Yaralanma bölgesinde, astrositler reaktif gliozise uğrarlar, burada aktive olurlar ve çoğalırlar, iltihabı azaltan ve doku onarımını destekleyen koruyucu molekülleri serbest bırakırlar.

Bu adımda, stereotaksik çerçeveye tamamen sedasyonlu bir fare yerleştirin. Burnunu izoflurana bağlı olan burun konisine sabitleyin. Ardından, kulak çubuklarını sıkın ve başın sabit olduğundan emin olun.

Kafayı göz hizasından kulak hizasına kadar tıraş edin. Daha sonra cildi üç alternatif izopropil alkol ve Betadine iyot çözeltisi ile sterilize edin. Daha sonra, kurumasını önlemek için her iki gözünüze de merhem sürün.

Ayak parmağını veya kuyruğunu sıkıştırarak hayvanın anestezisinin derinliğini izleyin. Fare, yanıt alınmadığında ve solunum yavaş ve eşit olduğunda uygun cerrahi düzlemdedir. Tek bir sert keside gözlerin hemen arkasından neredeyse kulaklar arasındaki noktaya kadar parasagital bir cilt kesisi yapın. Cildi bir kenara çekin ve sağ tarafı bir hemostat ile klipsleyin.

Mikroskop altında, neşterin donuk tarafını ve pamuk uçlu aplikatörleri kullanarak kafatasının üzerindeki zarı temizleyin. Daha sonra kafatasını %0.9 tuzlu su çözeltisine batırılmış pamuk uçlu bir aplikatör ile temizleyin ve tamamen kurumasını bekleyin. Küçük bir cetvel ve kalıcı bir işaretleyici kullanarak, kraniyotominin ön sınırını koronal sütürün 1 milimetre kaudalinde işaretleyin ve ardından kraniotominin sol kenarını sagital sütürün 1 milimetre lateralinde işaretleyin.

Daha sonra, kraniotominin sağ ve kaudal sınırlarını sırasıyla sagital ve koronal sütürlerden 4 milimetre uzakta işaretleyin. 0,5'lik bir matkap ucu kullanarak, kalıcı işaretleyici taslağını dikkatlice delin ve kafatasını tamamen kırmadığınızdan emin olun. İzole edilmiş parietal kemik parçasına forseps ile hafifçe bastırın. İnceltilmiş kemik, çevresi yeterince zayıf olduğunda çıkarılmaya hazırdır.

Şimdi, 23 gauge iğne ile donatılmış 10 mililitrelik bir şırınga kullanarak, izole edilen kemiğe ve delinmiş alana az miktarda% 0.9 salin uygulayın. Manipülatör kolunu stereotaksik cihaza takın. Ardından, keskin tarafı rostralli olarak bakacak şekilde prob tutucusuna yeni bir neşter bıçağı takın.

Manipülatör kolunu yoldan uzak tutarak, ucu kemiğin yan tarafına sokarak ve tek bir hareketle çekerek kemik parçasını bir çift açılı forseps ile dikkatlice kaldırın. Daha sonra, kurumasını önlemek ve mevcut olabilecek kanı emmek için ıslatılmış emilebilir jel köpüğün küçük bir parçasını açıkta kalan beynin üzerine yerleştirin. Jel köpük beynin üzerine yerleştirildikten sonra manipülatör kolunu yerine sallayın. Bıçağı jel köpüğün üzerinde ortalayacak şekilde ayarlayın.

Ardından jel köpüğü çıkarın ve bıçağı, ucu duraya temas edene kadar delmeden indirin. Stereotaksik çerçevenin dikey kolundaki sürmeli ölçeği kullanarak dorsal-ventral koordinatları işaretleyin. Daha sonra, manipülatör kolunu kullanarak, bıçağı yavaşça beynin içine tam olarak 3 milimetre indirin. Bıçağın 5 ila 10 saniye yerinde kalmasına izin verin.

Daha sonra stereotaksik kolu bıçakla rostral-kaudal yönde üç kez yavaşça hareket ettirin. Karşı uca hareket etmeden önce bıçağın kraniotominin rostral ve kaudal sınırlarına ulaşmasına izin verin. Daha sonra, stereotaksik kolu yavaşça kaldırın ve bıçağı beyinden çıkarın.

Fazla kan veya sıvıyı emmek için hemen beyin yüzeyine başka bir jel köpük parçası yerleştirin. Bu arada, stereotaksik kolu çıkarın ve neşter bıçağını atın. Kanama durduktan sonra jel köpüğü çıkarın.

Ethilon veya Prolene gibi emilmeyen dikişlerle cildi dikerek yarayı kapatın ve ameliyattan 9 ila 10 gün sonra dikişleri alın. Daha sonra, hidrasyonu sağlamak için 0,5 ila 1 mililitre laktasyonlu Ringer solüsyonunu deri altına uygulayın.