JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:18 dk. • July 8th, 2025
Tamponda perfüze edilmiş bir fare beynini ele alalım.
Beyin, patojenik bir bakteri olan streptomisine dirençli Listeria monocytogenes ile enfekte olur.
Perfüzyon adımı, beyindeki kanı uzaklaştırarak bakteri yükü ölçümlerinin dokudaki Listeria monocytogenes yükünü yansıtmasını sağlar.
Ardından, dokuyu parçalamak ve bakterileri serbest bırakmak için sterilize edilmiş bir homojenizatör kullanarak beyni homojenize edin.
Şimdi, tampon kullanarak beyin homojenatının seri dilüsyonlarını hazırlayın.
Bu seyreltmeleri bir antibiyotik olan streptomisin içeren beyin kalp infüzyon agar plakaları üzerine koyun.
Plakaları inkübe edin. Beyin kalp infüzyon agarı, Listeria monocytogenes büyümesi için besin sağlarken, streptomisin dirençli bakterileri seçer ve sadece streptomisine dirençli Listeria kolonilerinin oluşmasına izin verir.
Beyindeki canlı enfektif bakteri yükünün bir ölçüsü olan koloni oluşturan birimleri belirlemek için plakadaki koloni sayısını sayın.
Forseps kullanarak, beyni açığa çıkarmak için kafatasını açın ve beyni dikkatlice 5 mililitre 4 santigrat derece PBS içeren 15 mililitrelik bir tüpe aktarmak için beynin alt tarafı ile kafatasının tabanı arasına bir spatula yerleştirin.
Bir biyogüvenlik kabininde, ucu yerleştirin ve ayrı 15 mililitrelik konik tüplerde sıralı %5 çamaşır suyu, steril su, %75 etanol ve steril su solüsyonlarında 10 saniye boyunca bir doku homojenizatörü çalıştırın. Uç tamamen sterilize edildiğinde, enfekte olmuş beyni tüpünde homojenize edin.
Steril PBS'de homojenize edilen her organın on kat seri dilüsyonlarını hazırlayın ve dilüsyonları beyin kalp infüzyon agar plakaları üzerine plakalayın. Daha sonra, homojenat seyreltme kültürlerini gece boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin ve organ veya mililitre kan başına toplam bakteri sayısını belirlemek için her plakadaki koloni sayısını sayın.