JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 1:58 dk. • July 8th, 2025
İn vitro kan-beyin bariyeri veya BBB modeli içeren çok kuyulu bir plaka ile başlayın.
Bu model, matris kaplı bir zar ekinin üst veya kan tarafına yapışan endotel hücrelerinden ve alt veya beyin tarafındaki astrositlerden oluşur.
Bir kontrol kuyusunun üst odasına floresan bir boya olan floresein izotiyosiyanat veya FITC ekleyin.
Tersine, bir numune kuyucuğunun üst odasına FITC yüklü ferritin veya FITC-ferritin ekleyin ve ardından inkübe edin.
Kontrol kuyusunda, serbest FITC, BBB'den minimum geçiş ile üst bölme ile sınırlı kalır.
Bu arada, numune kuyucuğunda, FITC-ferritin kompleksleri endotel hücreleri üzerindeki reseptörlere bağlanır.
Bu, reseptör aracılı içselleştirmeye ve alt odaya taşımaya izin verir.
Daha sonra, her iki kuyucuğun alt odalarından düzenli olarak ortam toplayın ve floresan yoğunluğunu ölçün.
Kontrol daha düşük floresan sergilerken, numune daha yüksek floresan gösterir ve FITC ve FITC-ferritin için diferansiyel BBB geçirgenliğini doğrular.
Kan-beyin bariyer sistemi boyunca FITC-ferritin akısını ölçmek için, her formülasyon için en az üç kan-beyin bariyer sisteminin üst kısmına FITC yüklü ferritin veya serbest FITC ekleyin.
Bir inkübatörde yedi saat geçirdikten sonra, üç numune ve kontrol ekinin alt odalarından 2 mililitre ortam çekin. Toplanan numunelerin 500 mikrolitresinin floresan yoğunluğunu spektroflorometre ile ölçün ve protokolün yazılı kısmındaki talimatlara göre nüfuz eden FITC veya FITC-ferritin konsantrasyonunu belirleyin.